| Tat-LK15运载siRNA沉默RGC-5神经细胞nNOS基因的实验研究 |
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| 引用本文： | 彭捷,饶云,陆建华,吴昊澎,杨秀环,屠伟峰. Tat-LK15运载siRNA沉默RGC-5神经细胞nNOS基因的实验研究[J]. 中国药理学通报, 2015, 0(2): 278-283 |
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| 作者姓名： | 彭捷 饶云 陆建华 吴昊澎 杨秀环 屠伟峰 |
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| 作者单位： | 广州军区广州总医院麻醉科,广东广州,510010 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的探讨离体条件下细胞穿透肽Tat-LK15运载小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默RGC-5视神经节细胞(retinal ganglion cell line,RGC-5)神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,n NOS)基因的可行性,为在体条件下研究Tat-LK15运载siRNA沉默n NOS表达治疗神经病理性疼痛提供理论依据。方法 1通过凝胶阻滞分析测定Tat-LK15与siRNA的最佳交联比。流式细胞术检测Tat-LK15/FAM-siRNA以最佳交联比转染RGC-5细胞的转染效率;不同剂量Tat-LK15(1、2.5、5、10和20μg)孵育RGC-5细胞24 h,流式细胞术检测细胞凋亡率。2制备n NOS高表达的RGC-5细胞模型。3将RGC-5细胞随机分为5组:对照组、模型组、Tat-S组(Tat-LK15运载n NOS/siRNA转染模型细胞)、Lipo-S组(LipofectamineTMRNAi MAX运载n NOS/siRNA转染模型细胞)及Tat-N组(Tat-LK15运载NCsiRNA转染模型细胞),通过Q-PCR及Western blot检测各组nN OS表达水平。结果 Tat-LK15与siRNA质量比为2∶1时可完全包裹siRNA,达到最佳交联,此时其转染效率为(84.4±3.9)%。当Tat-LK15剂量为20μg(6.1μmol·L-1)时才出现一定细胞毒性,细胞凋亡率高于对照组[(10.3±1.1)%vs(7.4±0.9)%,P<0.05]。造模后RGC-5细胞nN OS表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,Tat-S组nN OS mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),Tat-S组与Lipo-S组相比无差异(P>0.05)。结论Tat-LK15能高效转染siRNA,细胞毒性低,离体条件下可有效运载siRNA沉默nN OS的基因表达。
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| 关 键 词： | 细胞穿透肽 Tat siRNA 基因治疗 神经型一氧化氮合酶 神经病理性疼痛 |
Delivery of therapeutic siRNA by Tat-LK15 targeting nNOS fusion gene in RGC-5 cells |
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| PENG Jie,RAO Yun,LU Jian-hua,WU Hao-peng,YANG Xiu-huan,TU Wei-feng. Delivery of therapeutic siRNA by Tat-LK15 targeting nNOS fusion gene in RGC-5 cells[J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2015, 0(2): 278-283 |
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| Authors: | PENG Jie RAO Yun LU Jian-hua WU Hao-peng YANG Xiu-huan TU Wei-feng |
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| Affiliation: | PENG Jie;RAO Yun;LU Jian-hua;WU Hao-peng;YANG Xiu-huan;TU Wei-feng;Dept of Anesthesiology,Guangzhou General Hospital of Guangzhou Military Command; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | cell penetrating peptides ( CPPs ) Tat siRNA gene therapy nNOS neuropathic pain |
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