大肠杆菌L-天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达 |
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引用本文: | 刘景晶,李晶,吴梧桐,胡梅清.大肠杆菌L-天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达[J].中国药科大学学报,1996(11). |
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作者姓名: | 刘景晶 李晶 吴梧桐 胡梅清 |
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作者单位: | 中国药科大学生物化学教研室,南京铁道医学院生物化学教研室 |
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摘 要: | 用一对与大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因(AnsB)两侧序列互补的寡核苷酸E1,E2作引物,以大肠杆菌野生株CPU210009的染色体DNA为模板,通过PCR扩增得到约1.2kb的DNA片段,将此片段插入pKK233-2的tac启动子下游,转化不同的大肠杆菌宿主菌株,结果表明以CPU210009为宿主菌时,转化子的酶表达量最高,重组L-天门冬酰胺酶占菌体总蛋白48.3%,发酵液酶活力达400IU/ml;比活为48IU/mg蛋白,SDS-PAGE显示纯化后的重组L-天门冬酰胺酶分子量与天然酶相同,均为140KD。
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关 键 词: | 大肠杆菌 L-天门冬酰胺酶Ⅱ 基因表达 |
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