| ctB和ure I双基因融合表达及其免疫特性分析 |
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| 引用本文： | 王保宁,杨晓芳,施桥发,李明远,陈翠萍,曹康,李虹.ctB和ure I双基因融合表达及其免疫特性分析[J].细胞与分子免疫学杂志,2006(3). |
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| 作者姓名： | 王保宁 杨晓芳 施桥发 李明远 陈翠萍 曹康 李虹 |
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| 作者单位： | 四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室，兰州生物制品研究所 甘肃兰州730046，四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室，四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室，四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室，四川大学人类疾病生物治疗国家重点实验室，四川成都610041，中国药品生物制品检定所，四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室，四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室，四川大学人类疾病生物治疗国家重点实验室，四川成都610041，四川成都610041，四川成都610041，四川成都610041，四川成都610041，北京100050，四川成都610041，四川成都610041 |
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| 基金项目： | 国家科技部重点项目人类疾病动物模型及防治策略专项资助(No.96-A23-06-02) |
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| 摘 要： | 目的构建霍乱毒素B亚单位(CtB)和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(UreI)融合的原核表达质粒pET32a( )ctB/ureI,并初步研究融合蛋白CtB/UreI的表达特性和免疫特性。方法PCR从pUC18ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a( )/ureI的ureI基因5′端插入ctB基因,构建ctB和ureI双基因原核表达质粒pET32a( )ctB/ureI,转该质粒于E.coliBL-21(DE3),经酶切和序列分析鉴定工程菌。IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-ProAnalizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠。用Westernblot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性。结果工程菌含完整的ctB和ureI基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%。在22℃,1mmol/LIPTG诱导4h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%。Westernblot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体。结论成功构建了能表达CtB/UreI蛋白的大肠杆菌表达菌株。对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和UreI的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础。
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| 关 键 词： | 幽门螺杆菌 霍乱毒素B亚单位 尿素膜通道蛋白 融合表达 免疫特性 |
Expression and immunogenesity analysis of a recombinant fusion protein of V.Cholera ctB and H.pylori ure I |
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| WANG Bao-ning,YANG Xiao-fang,SHI Qiao-fa,LI Ming-yuan,CHEN Cui-ping,CAO Kang,LI Hong.Expression and immunogenesity analysis of a recombinant fusion protein of V.Cholera ctB and H.pylori ure I[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2006(3). |
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| Authors: | WANG Bao-ning YANG Xiao-fang SHI Qiao-fa LI Ming-yuan CHEN Cui-ping CAO Kang LI Hong |
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| Institution: | WANG Bao-ning,YANG Xiao-fang,SHI Qiao-fa,LI Ming-yuan,CHEN Cui-ping,CAO Kang,LI Hong * Department of Microbiology,School of preclinical and forensic medicine,Sichuan University,Chengdu 610041,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Helicobacter pylori cholera toxin subunit B(CtB) urea membrane channel protein(Ure I) fused expression immunity analysis |
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