| 摘 要： | 【目的】观察膝痹通络方对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的软骨细胞退变的影响,并从丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)-MAPK激酶(MEK)信号通路探讨其机制。【方法】提取新生SD大鼠四肢关节软骨细胞,选择P1代细胞进行实验,共设5组:正常对照组,IL-1β组,高、中、低浓度中药组。正常对照组软骨细胞加入正常大鼠血清培养;IL-1β组软骨细胞加入正常大鼠血清、20 ng/mL IL-1β培养;高、中、低浓度中药组软骨细胞分别加入对应浓度的膝痹通络方含药血清进行培养,并加入20 ng/mL IL-1β。24 h后倒置显微镜下观察软骨细胞大小、密度、形态,采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测软骨细胞基质金属蛋白酶3(MMP3)、聚蛋白多糖酶4/5(ADAMTS4/5)、蛋白多糖(A-CAN)、性别决定区Y框蛋白(SOX9)等软骨退变相关基因的表达,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测软骨细胞SOX9、基质金属蛋白酶13(MMP13)、磷酸化原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶(P-Raf1)、Raf-1、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(P-MEK1)、MEK1的蛋白表达。【结果】倒置显微镜下可见,经IL-1β炎性因子诱导后的软骨细胞出现退变形态;q PCR结果显示,与IL-1β组比较,各浓度中药组MMP3、ADAMTS4/5的mRNA表达水平降低(P0.05),A-CAN的mRNA表达水平升高(P0.05),高浓度中药组SOX9的mRNA表达水平升高(P0.05);Western Blot结果显示,与IL-1β组比较,各浓度中药组软骨细胞MMP13蛋白表达,Raf1、MEK1磷酸化水平降低(P0.05),SOX9蛋白表达水平升高(P0.05)。【结论】膝痹通络方可延缓IL-1β诱导的软骨细胞退变,其机制可能与调节MAPK-MEK信号通路相关蛋白及基因表达有关。
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