| 抗肿瘤的PF4及相关肽基因重组腺病毒的构建 |
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| 引用本文： | 吴立华,刁世勇,蔡英林,顾洁,任倩,李彬,杨仁池,韩忠朝.抗肿瘤的PF4及相关肽基因重组腺病毒的构建[J].中国肿瘤临床,2003,30(8):551-555. |
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| 作者姓名： | 吴立华 刁世勇 蔡英林 顾洁 任倩 李彬 杨仁池 韩忠朝 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院,中国协和医科大学血液学研究所中法实验室,天津市,300020 |
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| 基金项目： | 国家攀登计划项目(编号:95-专-10)，长江学者计划以及天津市科技发展计划项目资助(编号:003114311) |
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| 摘 要： | 利用细菌内同源重组法构建含PF4(血小板第四因子)全长1-70及PF4的小肽17-70基因的重组腺病毒。方法:将连有MCP-1信号肽的PF4全长及其C末端的改构体PF4-17-70两个基因片段克隆至腺病毒穿梭质粒pAdshuttle-CMV中,形成转移质粒pAdshuttle/PF4(1-70)和pAdshuttle/PF4(17-70),将之酶切线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,抽提并鉴定含目的基因的重组体质粒,而后用磷酸钙共沉淀方法转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒AdPF4(1-70)和AdPF4(17-70)。采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定,扩增并纯化病毒,用TCID50方法测病毒滴度,利用带有CMV-LacZ的对照重组腺病毒(Ad-LacZ)对感染效率进行监测。结果:利用电穿孔法分别将质粒pAdshuttle/PF4(1-70),pAdshuttle/PF4(17-70)与质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183获得70%以上的阳性重组体细菌克隆。PCR检测结果表明重组腺病毒已含有目的基因,滴度为1×1010pfu/ml。结论:利用细菌内同源重组法可以简便、快捷地构建含PF4(1-70)、PF4(17-70)cDNA的腺病毒载体,为两者在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 腺病毒 PF4 同源重组 细菌 肿瘤 |
| 文章编号： | 1000-8179(2003)08-0551-05 |
| 修稿时间： | 2002年10月10 |
Construction of PF4(1-70) and PF4(17-70) Gene Recombinant Adenovirus |
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| Wu Lihua Diao Shiyong Cai Yinglin et al Institute of Hematology,Hospital of Blood Diseases,Chinese Academy of Medical Sciences,Tianjin.Construction of PF4(1-70) and PF4(17-70) Gene Recombinant Adenovirus[J].Chinese Journal of Clinical Oncology,2003,30(8):551-555. |
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| Authors: | Wu Lihua Diao Shiyong Cai Yinglin Institute of Hematology Hospital of Blood Diseases Chinese Academy of Medical Sciences Tianjin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Adenovirus vector PF4Homogenouse recombinant Bacteria Tumor |
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