RNAi 抑制GSK-3β 基因表达增强卵巢癌 SKOV3细胞对紫杉醇敏感度的研究 |
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作者姓名: | 赵天皎 董星河 王明勇 董庆彦 |
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作者单位: | 1. 濮阳油田总医院妇产科,河南濮阳,457001 2. 濮阳油田总医院神经外科,河南濮阳,457001 3. 新乡医学院检验系 |
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摘 要: | 目的构建GSK-3β基因特异性短发卡状(shRNA)干扰载体,观察RNA干扰技术对卵巢癌SKOV3细胞 GSK-3β基因表达的抑制作用,并且探讨促进紫杉醇药物敏感度的机制。 方法设计合成并构建针对GSK-3 β mRNA的特异性shRNA干扰质粒,将干扰质粒转染SKOV3细胞。筛选稳定转染的单细胞扩大培养,应用 RT-PCR、Western blot方法检测各组细胞GSK-3β表达抑制情况。流式细胞学检测法(FACS)检测细胞凋 亡率。比较抑制GSK-3β 基因前后卵巢癌SKOV3细胞抵抗紫杉醇药物的差异。结果成功构建pGSK3β-shRNA 干扰载体。SKOV3 细胞转染pGSK3β-shRNA干扰载体后,RT-PCR、Western blot方法显示,转染后GSK-3β mRNA 和蛋白表达均显著下降。FACS检测结果显示,转染pGSK3β-shRNA干扰载体,不同浓度紫杉醇作用 24h后,卵巢癌SKOV3细胞对紫杉醇敏感度都有显著性提高。细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论运用 RNAi 技术构建的pGSK3β-shRNA干扰载体能特异、高效抑制靶基因GSK-3β表达;降低卵巢癌细胞中GSK-3 β基因表达水平,能增强卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感度,促进肿瘤细胞凋亡。
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关 键 词: | 卵巢癌 RNA干扰 GSK-3β 细胞凋亡 |
收稿时间: | 2010-03-01; |
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