RNAi 抑制GSK-3β 基因表达增强卵巢癌 SKOV3细胞对紫杉醇敏感度的研究

 目的构建GSK-3β基因特异性短发卡状（shRNA）干扰载体，观察RNA干扰技术对卵巢癌SKOV3细胞 GSK-3β基因表达的抑制作用，并且探讨促进紫杉醇药物敏感度的机制。 方法设计合成并构建针对GSK-3 β mRNA的特异性shRNA干扰质粒，将干扰质粒转染SKOV3细胞。筛选稳定转染的单细胞扩大培养，应用 RT-PCR、Western blot方法检测各组细胞GSK-3β表达抑制情况。流式细胞学检测法（FACS）检测细胞凋 亡率。比较抑制GSK-3β 基因前后卵巢癌SKOV3细胞抵抗紫杉醇药物的差异。结果成功构建pGSK3β-shRNA 干扰载体。SKOV3 细胞转染pGSK3β-shRNA干扰载体后，RT-PCR、Western blot方法显示，转染后GSK-3β mRNA 和蛋白表达均显著下降。FACS检测结果显示，转染pGSK3β-shRNA干扰载体，不同浓度紫杉醇作用 24h后，卵巢癌SKOV3细胞对紫杉醇敏感度都有显著性提高。细胞凋亡率显著增加（P<0.05）。结论运用 RNAi 技术构建的pGSK3β-shRNA干扰载体能特异、高效抑制靶基因GSK-3β表达；降低卵巢癌细胞中GSK-3 β基因表达水平,能增强卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感度,促进肿瘤细胞凋亡。