大鼠移植胰腺再灌注后细胞凋亡及Bax和Bcl-2的表达

目的：观察胰腺移植再灌注后胰腺细胞凋亡发生的过程，并通过检测bax和bcl-2基因的表达，认识胰腺细胞凋亡的相关调控基因。方法：实验于2002-09／2004-06在解放军第九十七医院中心实验室完成。①60只SD大鼠随机分成7组，假手术组5只，冷缺血2h组5只，冷缺血2h再灌注1，3,6，9，12h组（再灌注组每组受体5只，供体5只）。②取移植胰腺标本切片，苏木精-伊红染色后光镜及电镜观察各组的胰腺组织的病理变化。③通过流式细胞仪检测各组胰腺细胞的凋亡百分比。④采用免疫组织化学方法检测各组胰腺组织中Bax，Bel-2蛋白的表达。采用Sinierope等综合计分法并加以改进进行半定量分析。每例至少选择5个高倍视野记数1000个细胞中的阳性细胞个数进行阳性细胞数计分，阳性细胞数〈5％为阴性，6％-25％为1分，26％～50％为2分。5l％-74％为3分，〉75％为4分。着色强度计分则是以多数阳性细胞呈现的染色特征计分：淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。阳性细胞数计分＋着色强度计分即为综合得分。二三分为弱阳性（＋），四五分为中等阳性（＋＋），六七分为强阳性（＋＋＋）。结果：60只大鼠全部进入结果分析。①胰腺移植后早期即可观察到细胞凋亡的典型改变。②胰腺冷缺血再灌注后发生凋亡的高峰期为再灌注后3h，再灌注6h组较再灌注3h细胞凋亡有所减少[凋亡率分别为（12．61&;#177;2．94）％，（6．35&;#177;2．19）％，P〈0．01]。再灌注9h组及再灌注12h组细胞凋亡进一步减少[凋亡率分别为（3.67&;#177;1.44）％，（3．33&;#177;1．03）％，P〈0．05]。③假手术组与冷缺血2h组均未见Bax蛋白表达，再灌注1h组Bax（＋＋），而未见Bcl-2蛋白表达；至再灌注3h组Bax表达增强为Bax（＋＋＋），以后各组表达有所下降。Bel-2蛋自在假手术组、冷缺血2h组及再灌注1h组均未见表达，再灌注3h组及以后各组表达为（＋）。结论：细胞凋亡是胰腺移植后的早期事件，移植胰腺冷缺血再灌注后的凋亡高峰发生在再灌注后3h；移植胰腺的细胞凋亡是受基因调控的，Bax基因可能促进了胰腺细胞的凋亡，而bcl-2基因可能抑制细胞凋亡。

n oCellular apoptosis and expressiof Bax and Bcl-2 in rats after pancreas transplantation and reperfusion