家蚕过敏原细胞视黄酸结合蛋白(CRABP)的克隆表达及生物学分析

目的研究家蚕细胞视黄酸结合蛋白(CRABP)的原核克隆表达及生物学意义。方法家蚕总RNA提取;根据ref|NM-001043899|设计引物;RT-PCR扩增;PET-28a质粒目的基因表达载体的构建,转化大肠杆菌BL21(DE3);Western bolt检测重组CRABP;采用MEGA5工具包和clustalw2进行同源性分析;采用ProtParam Tools预测CRABP的理化性质;采用PSIPRED和SWISS-MODEL预测其蛋白质结构。利用Preprod、IEDB和DNAStar对CRABP蛋白T、B细胞抗原表位进行预测。结果克隆出家蚕CRABP基因开放阅读框399bp,编码132个氨基酸。CRABP工程菌(DE3)经IPTG诱导高效表达CRABP重组的可溶性蛋白,分子量约18kDa。重组CRABP能够与家蚕过敏患者血清IgE结合。测序证明克隆的家蚕CRABP蛋白与黑脉金斑蝶细胞视黄酸结合蛋白(gb|EHJ79039.1|)同源性为94%。系统进化树结果显示家蚕与小菜蛾亲缘关系比较近。理化性质预测显示CRABP蛋白质较稳定。二级结构及三级结构预测结果显示CRABP的结构主要以β折叠组成。T细胞抗原表位预测得到4个肽序列(4-12、20-29、51-59、80-88)。B细胞抗原表位预测得到4个肽序列(1-16、40-55、67-82、105-120)。结论克隆并表达的家蚕CRABP蛋白具有良好的变应原性,为进一步研究家蚕过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。