miR-150促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭的机制研究

目的 探讨miR-150是否通过靶向调控程序性细胞死亡因子4（PDCD4）促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭，进一步揭示miR-150在鼻咽癌中的癌基因作用。方法 2014年3-6月，培养鼻咽癌细胞株CNE-2，取生长良好的CNE-2用于实验。设计合成PDCD4野生型引物序列以及突变型引物序列，连接到含有荧光素酶载体质粒上，检测荧光素酶活性。分别瞬时转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-ctr、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2，48 h后采用Western blotting法检测PDCD4表达水平。分别瞬时转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2，分别于培养24、48、72、96 h后测定其吸光度（OD）值，反映其增殖能力。分别瞬时转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2，采用Transwell侵袭实验检测CNE-2侵袭能力。结果 无miR-150转染的PDCD4野生型细胞株荧光素酶活性为（0.975±0.112），miR-150转染的PDCD4野生型细胞株荧光素酶活性为（0.588±0.042），差异有统计学意义（t=7.853,P=0.018）。无miR-150转染的PDCD4突变型细胞株荧光素酶活性为（0.992±0.135），miR-150转染的PDCD4突变型细胞株荧光素酶活性为（0.875±0.095），差异无统计学意义（t=1.461,P=0.281）。转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-ctr、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2 PDCD4表达水平分别为（0.655±0.058）、（1.147±0.152）、（0.704±0.068）、（0.313±0.036），差异有统计学意义（F=43.410，P＜0.001）；其中，转染Vector、miR-ctr、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2 PDCD4表达水平均低于转染pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2，差异有统计学意义（P＜0.05）。转染物和时间对CNE-2增殖能力存在交互作用，转染物和时间对CNE-2增殖能力均存在主效应（P＜0.001）。转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2穿膜细胞数分别为（56.6±7.5）、（26.5±3.7）、（30.5±4.7）、（55.2±6.9）个，差异有统计学意义（F=18.550，P=0.014）；其中，转染pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors的CNE-2穿膜细胞数少于转染Vector、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 miR-150通过抑制PDCD4的表达，继而增强鼻咽癌细胞的增殖能力和侵袭能力。