黄酒多酚对同型半胱氨酸诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响及其机制研究

目的 验证黄酒多酚（YWPC）是否具有抑制同型半胱氨酸（Hcy）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移的作用以及其产生作用的信号通路。方法 采用组织贴块法培育SD大鼠胸主动脉VSMCs，取第4～7代细胞用于实验。细胞分为5组，分别为对照组，Hcy组（500 μmol/L Hcy），YWPC 1 mg/L组（500 μmol/L Hcy+1 mg/L YWPC），YWPC 10 mg/L组（500 μmol/L Hcy+10 mg/L YWPC），YWPC 100 mg/L组（500 μmol/L Hcy+100 mg/L YWPC）。采用MTT法检测VSMCs增殖情况；细胞划痕实验和Transwell法检测VSMCs迁移和侵袭情况；Western blotting法检测p-AKT/AKT表达情况。为验证YWPC是否经Pi3K/AKT通路发挥抑制VSMCs的增殖和迁移，分别加入LY-294002和胰岛素生长因子1（IGF-1）用来抑制和激活Pi3K/AKT通路，细胞被分为Hcy组，YWPC组，LY-294002＋Hcy组，LY-294002＋YWPC组；Hcy组，YWPC组，IGF-1＋Hcy组，IGF-1＋YWPC组，再分别采用上述方法检测VSMCs增殖、迁移和侵袭情况。结果 培养大鼠胸主动脉VSMCs，2周左右细胞融合可以传代，经SM-actin细胞免疫荧光鉴定及DAPI核染，确定细胞纯度在99%以上。24、48 h时，5组OD值比较，差异有统计学意义（F=52.575，P=0.016；F=83.756，P=0.014）；其中Hcy组OD值高于对照组和YWPC组，且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。24、48、72、96 h时，5组VSMCs迁移面积比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；其中Hcy组VSMCs迁移面积多于对照组（P＜0.05）；YWPC组VSMCs迁移面积低于Hcy组，且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。48 h时，5组迁移细胞数比较，差异有统计学意义（F=79.354，P=0.001）；其中Hcy组穿透Transwell膜细胞数高于对照组（P＜0.05）；YWPC组穿透Transwell膜细胞数低于Hcy组，且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。5组p-AKT/AKT比较，差异有统计学意义（F=56.723，P=0.002）；其中Hcy组p-AKT/AKT高于对照组（P＜0.05）；YWPC组p-AKT/AKT低于Hcy组，且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。加入LY-294002:24 h时，各组OD值、VSMCs迁移面积比较，差异有统计学意义（F=46.875，P=0.004；F=67.723，P=0.002）；其中LY-294002+Hcy组OD值、VSMCs迁移面积低于Hcy组（P＜0.05）；LY-294002+Hcy组与LY-294002+YWPC组OD值、VSMCs迁移面积比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。48 h时，各组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较，差异有统计学意义（F=52.904，P=0.003；F=87.904，P=0.001）；其中LY-294002+Hcy组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT低于Hcy组（P＜0.05）；LY-294002+Hcy组与LY-294002+YWPC组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。加入IGF-1:24 h时，各组OD值、VSMCs迁移面积比较，差异有统计学意义（F=48.052，P=0.007；F=63.085，P=0.002）；其中IGF-1+YWPC组OD值、VSMCs迁移面积高于YWPC组（P＜0.05）；IGF-1+Hcy组与IGF-1+YWPC组OD值、VSMCs迁移面积比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。48 h时，各组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较，差异有统计学意义（F=55.941，P=0.008；F=65.011，P=0.005）；其中IGF-1＋YWPC组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT高于YWPC组（P＜0.05）；IGF-1+Hcy组与IGF-1+YWPC组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 YWPC通过抑制Pi3K/AKT信号通路抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移。