周期素依赖性蛋白激酶5过度活性与肾小球足细胞凋亡的关系研究

目的 通过在肾小球足细胞中转染p25基因，探讨周期素依赖性蛋白激酶5（Cdk5）的活性对足细胞结构及功能的影响。方法 2014年度，于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中培养分化成熟的小鼠离体足细胞，将足细胞分为对照组、空转染组和p25转染组。应用pAdTrack-CMV病毒载体克隆p25基因，并转染足细胞，48 h收集细胞；采用Western blotting法测定Cdk5、p25、p35及细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase3的表达水平；应用免疫沉淀和同位素γ-32P标记法测定Cdk5活性；足细胞免疫荧光化学染色，观察Cdk5、p35在足细胞中的表达，以及足细胞Actin的排列情况。结果 HEK293细胞Cdk5表达阳性，p35表达阴性，肾脏皮质、足细胞和肾小球中均有不同程度的Cdk5和p35的表达。对照组和空转染组p25表达阴性，p25转染组p25表达阳性。各组细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase3表达水平和Cdk5活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；其中p25转染组细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase3表达水平和Cdk5活性高于对照组和空转染组（P＜0.05）。p25转染组足细胞内Actin排列紊乱，细胞形态发生异常改变，对照组和空转染组细胞内Actin排列正常，细胞形态没有发生改变。结论 p25引起Cdk5过度活性可致肾小球足细胞形态改变，Actin排列紊乱，诱发细胞凋亡。因此，Cdk5的活性在维持足细胞正常结构和功能方面发挥重要作用。