| 正、反义β-1,4半乳糖基转移酶Ⅱ和Ⅴ地高辛标记RNA探针的制备和应用 |
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| 引用本文： | 龚蕾蕾,沈爱国,严美娟,何江虹,顾建新.正、反义β-1,4半乳糖基转移酶Ⅱ和Ⅴ地高辛标记RNA探针的制备和应用[J].解剖学研究,2003,25(4):273-276,F003. |
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| 作者姓名： | 龚蕾蕾 沈爱国 严美娟 何江虹 顾建新 |
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| 作者单位： | 1. 南通医学院江苏省神经再生重点实验室,南通,226001
2. 复旦大学上海医学院基因研究中心,上海,20032 |
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| 基金项目： | 江苏省神经再生重点实验室开放课题 (JSK0 2 0 12 )，江苏省高校自然科学研究计划项目 ( 0 3KJB180 10 9) |
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| 摘 要： | 目的 为了探讨 β1 ,4半乳糖基转移酶 Ⅱ和Ⅴ (β1 ,4 galactosyltransferaseI,β 1 ,4 GalT ⅡandⅤ )表达定位 ,本实验通过分子生物学手段 ,制备正、反义 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针。 方法 设计引物 ,提取小鼠脑总RNA ,通过RT PCR方法 ,得到 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ基因序列 ,将其克隆到pGEM T载体。根据其多克隆酶切位点和Sp6及T7位置 ,分别酶切后作为转录模板 ,通过Sp6及T7RNA聚合酶 ,得到正、反义 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后 ,最后通过原位杂交分析标记探针的特异性和杂交效果。结果 本实验得到了高效价的正、反义 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针 ,并表现出很好的杂交效果。结论 正、反义β 1 ,4 GalT Ⅱ和ⅤRNA原位杂交探针的制备 ,为进一步研究 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ在组织中的表达 ,尤其在神经组织的定位奠定基础
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| 关 键 词： | β1 4半乳糖基转移酶Ⅱ和Ⅴ RNA探针 原位杂交 荧光定量 小鼠 |
The preparation of RNA probes of the sense and antisense β1,4-galactosyltransferase-Ⅰ labeled with digoxingenin |
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| Gong Leilei,Shen Aiguo,Yan Meijuan,He Jianghong,Gu Jianxin. Nantong Medical College,The Jangsu Key Labtory of Neuroregeneration,Nantong China.The preparation of RNA probes of the sense and antisense β1,4-galactosyltransferase-Ⅰ labeled with digoxingenin[J].Anatomy Research,2003,25(4):273-276,F003. |
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| Authors: | Gong Leilei Shen Aiguo Yan Meijuan He Jianghong Gu Jianxin Nantong Medical College The Jangsu Key Labtory of Neuroregeneration Nantong China |
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| Institution: | Gong Leilei,Shen Aiguo,Yan Meijuan,He Jianghong,Gu Jianxin. Nantong Medical College,The Jangsu Key Labtory of Neuroregeneration,Nantong 226001 China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | β1 4-galactosyltransferase Ⅱ and Ⅴ RNA probe In situ hybridization RT-PCR Mouse |
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