| A型肉毒神经毒素轻链人源性抗体的筛选、表达与检测 |
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| 引用本文： | 赵鹏,胡颖,安佳佳,韦娜,熊向华,汪建华,张惟材,徐威.A型肉毒神经毒素轻链人源性抗体的筛选、表达与检测[J].军事医学,2016(5):396-400. |
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| 作者姓名： | 赵鹏 胡颖 安佳佳 韦娜 熊向华 汪建华 张惟材 徐威 |
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| 作者单位： | 1. 军事医学科学院生物工程研究所,北京100071;沈阳药科大学生命科学与生物制药学院,沈阳 110016;2. 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071;3. 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院,沈阳,110016 |
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| 摘 要： | 目的 从全合成人源性噬菌体单链抗体库中筛选抗A型肉毒神经毒素轻链(BoNT/A LC)特异性单抗,并进行全抗的表达、纯化与鉴定.方法 根据大肠杆菌密码子偏好性优化并合成BoNT/A LC序列,克隆至pTIG质粒,转化BL21(DE3) plysS感受态细胞,IPTG诱导表达后Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白.利用纯化的轻链蛋白从噬菌体抗体库中经“吸附-洗脱-扩增”程序淘选富集抗体并进行特异性筛选.PCR扩增抗体轻重链可变区分别连入L293-CL和H293载体,瞬时共转染293-F细胞,培养上清经Protein A柱纯化,通过SDS-PAGE、Western印迹和ELISA检测抗体纯度和特异性.结果 可溶性表达的BoNT/A LC占全菌蛋白的36.8％,纯化后蛋白纯度达99％.从噬菌体抗体库中筛选到10株单抗,选择其中特异性最好的两株单抗Lab1、Lab2制备了全抗,Western印迹和ELISA检测结果显示其可特异性识别结合BoNT/A LC蛋白.结论 该研究得到了两株特异性的BoNT/A LC抗体,可能用于A型肉毒毒素检测和肉毒中毒治疗.
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| 关 键 词： | A型肉毒神经毒素 噬菌体抗体库 抗体 单克隆 |
Screening,expression and detection of anti-BoNT/A light chain humanized antibody |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | botulinum neurotoxin serotype A phage antibody library monoclonal antibody |
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