| 肝癌细胞上皮-间质转换模型的建立与差异性表达微小RNA分子的高通量筛选 |
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| 引用本文： | 王海洋,曾泉,张彪,李思霆,南雪,何丽娟,岳文,周军年,裴雪涛. 肝癌细胞上皮-间质转换模型的建立与差异性表达微小RNA分子的高通量筛选[J]. 军事医学, 2016, 0(6). DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2016.06.002 |
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| 作者姓名： | 王海洋 曾泉 张彪 李思霆 南雪 何丽娟 岳文 周军年 裴雪涛 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室,北京100850;军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心,广州510005 |
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| 基金项目： | 广州市健康医疗协同创新重大专项专题资助项目(201400000003-1)，国家自然科学基金青年科学基金资助项目(81201611) |
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| 摘 要： | 目的 拟利用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝癌细胞发生上皮-间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT),建立EMT模型.方法 在低血清培养条件下,用TGF-β1处理肝癌细胞2～6d,观察细胞形态变化,采用Western印迹检测EMT典型标志物的表达变化,流式细胞术检测肝癌肿瘤干细胞标志物CD13和EpCAM的表达变化,并利用微小RNA芯片技术(miRNA chip)筛选和分析TGF-β1处理前后差异表达的miRNA.结果 经10 ng/ml TGF-β1诱导2～6d后,多数细胞形态由上皮样转变为成纤维样,细胞间隙明显增大;Western印迹定量分析结果显示,10 ng/ml TGF-β1处理后,肝癌细胞E-钙黏蛋白(cadherin)表达水平显著性下调;流式细胞术结果显示,CD13和EpCAM显著性上调;对miRNA芯片结果分析得到35种差异表达比较显著的miRNA,经过生物信息学分析,这些差异表达的miRNA在转录调控中发挥了重要作用.结论 在低血清培养条件下,用10 ng/ml TGF-β1处理肝癌细胞2～6d,细胞发生明显的EMT过程,利用该法可成功建立肝细胞癌的体外EMT细胞模型,在此模型中,可对差异表达的miRNA进行筛选分析和进一步的功能研究.
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| 关 键 词： | 癌,肝细胞 上皮-间质转换 转化生长因子β1 微小RNA |
Establishment of HCC epithelial-mesenchymal transition model and high throughout screening for differential expression of miRNAs |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | carcinoma,hepatocellular epithelial-mesenchymal transition TGF-β1 miRNAs |
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