恶性疟原虫FCC1／HN株己糖激酶基因的扩增、克隆和序列分析

目的扩增恶性疟原虫FCC1／HN株的己糖激酶(HK)编码基因，构建其原核和真核表达重组质粒．测定其序列，比较它及它推导的蛋白质与恶性疟原虫其他株和人之间的差异。方法用PCR方法从FCC1／HN株基因组中扩增HK基因；将它分别定向克隆到原核表达质粒pET-30a( )和真核表达质粒pCDNA3，分别转化大肠埃希菌BL21／DE3和JM109感受态细菌；经酶切、PCR扩增鉴定筛选到阳性重组克隆，用双脱氧链末端终止法测定其序列，用生物信息学软件分析HK序列及进行同源性比较。结果PCR扩增得到特异的FCC1／HN株HK基因，大小为1482bp，编码493个氨基酸。其氨基酸序列与3D7株完全相同．与K1株的同源性高达99．8％，但与人的4型HK的同源性只有23．2％～26．6％。结论获得恶性疟原虫FCC1／HN株的HK基因，成功构建了其原核和真核表达质粒，并测定了其序列；恶性疟原虫的HK在不同的分离株间高度保守，但与人的同源性很低．可能是一个潜在的药物靶标。