GM—CSF／IL-3融合蛋白质量标准的研究和建立

目的：建立重组GM—CSF／IL-3融合蛋白的质控标准和检测方法，以用于该产品的常规质量控制。方法：用TF-1／MTT细胞增殖试验定量测定GM—CSF／IL-3融合蛋白体外生物学活性；用抗GM—CSF和IL-3的抗体分别进行WesternBlot进行鉴别试验；用C8-HPLC和SDS—PAGE测定蛋白纯度；用胰蛋白酶消化/C18-HPLC进行肽图分析；用顶空进样气相色谱法检测甲醇残留量；还原型SDS—PAGE测定融合蛋白相对分子质量；其他原液和成品检测项目参照2005年版中国药典三部的方法进行。结果：GM～CSF／IL-3融合蛋白的原液及成品与TF-1细胞的反应呈典型的S型曲线，符合四参数方程y=（A—D）／[1＋（x／C）^B）]＋JD，相关系数大于0．99，成品和原液的回收率均大于94％，RSD均小于20％；与GM—CSF和IL-3抗体进行的Western Blot均为阳性；原液纯度大于95．0％；甲醇残留量小于0．005％，其他项目均符合2005年版中国药典三部要求。结论：建立的重组GM—CSF／IL-3融合蛋白质控标准和检测方法可以有效控制该制品的质量，并确保制品的安全与有效，已用于该制品的常规检定。