| AMP激活的蛋白激酶α2大肠杆菌双杂交诱饵重组质粒的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 符庆瑛,高钰琪.AMP激活的蛋白激酶α2大肠杆菌双杂交诱饵重组质粒的构建及鉴定[J].第三军医大学学报,2006,28(19):1923-1926. |
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| 作者姓名： | 符庆瑛 高钰琪 |
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| 作者单位： | 第三军医大学高原军事医学系病理生理学与高原生理学教研室,全军高原医学重点实验室,重庆,400038;第三军医大学高原军事医学系病理生理学与高原生理学教研室,全军高原医学重点实验室,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 目的 构建大肠杆菌双杂交系统的诱饵重组质粒.方法 PCR扩增大鼠AMP激活的蛋白激酶α2(AMP-activated protein kinase α2,AMPKα2)蛋白编码区cDNA,与大肠杆菌双杂交表达载体pBT构建融合蛋白表达质粒pBTAMPKα2.经酶切和测序鉴定后,将pBT-AMPKα2转化XL-1 Blue MRF'大肠杆菌报告菌株,检测诱饵融合蛋白的表达.并用pBT-AMPKα2和pTRG空载体共转化XL-1 Blue MRF'菌株,通过3-氨基-1,2,4-三唑(3-amino-1,2,4-triazole,3-AT)选择性筛选平板检测诱饵融合蛋白的自激活作用.结果 酶切和测序结果表明AMPKα2蛋白编码序列成功克隆入pBT载体,融合区阅读框正确.诱饵重组质粒pBT-AMPKα2能表达λcL/AMPKα2融合蛋白.转化有pBT-AMPKα2和pTRG空载体的XL-1 Blue MRF'大肠杆菌报告菌株在3-AT选择性筛选平板上不生长,而在no 3-AT非选择性筛选平板上生长良好,表明pBT-AMPKα2重组质粒能在大肠杆菌细胞中正确表达且无自激活作用.结论 构建的pBT-AMPKαt2诱饵重组质粒可用于下一阶段的cDNA文库筛选.
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| 关 键 词： | AMP激活的蛋白激酶 大肠杆菌双杂交 诱饵质粒 |
| 文章编号： | 1000-5404（2006）19-1923-04 |
| 收稿时间： | 2006-01-11 |
| 修稿时间： | 2006-01-112006-05-07 |
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