兔气管纤毛上皮细胞原代培养的生物学特性及其体外生长规律 |
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引用本文: | 张龙芳,崔鹏程,陈文弦,刘智,李贵泽,孙永柱.兔气管纤毛上皮细胞原代培养的生物学特性及其体外生长规律[J].中国临床康复,2006,10(1):34-36,i0002. |
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作者姓名: | 张龙芳 崔鹏程 陈文弦 刘智 李贵泽 孙永柱 |
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作者单位: | 解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科,陕西省西安市710038 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(30171007) |
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摘 要: | 目的:建立兔气管纤毛上皮细胞原代培养模型,观察其体外培养条件下的生物学特性并确定其体外生长规律。方法:实验于2005-03/07在解放军第四军医大学唐都中心实验室完成。①纤毛上皮细胞提取及培养:日本大耳兔20只,利用酶消化法分离获取兔气管纤毛上皮细胞,无血清生长因子培养基(成分:DMEM:Ham'sF12为1:1,并加入以下激素及生长因子:10mg/L胰岛素、5mg/L转铁蛋白、20μg/L甲状腺素、0.4mg/L氢化可的松、7.5mg/L内皮细胞生长支持物、25μg/L表皮生长因子、1mmol/L-谷氨酰胺,100IU/mL青霉素,50mg/L链霉素)体外培养。②细胞纯度及鉴定:用抗角蛋白单克隆抗体进行SP法免疫细胞化学反应,二氨基联苯胺显色阳性为上皮细胞。扫描电镜观察细胞表面结构。结果:①气管上皮细胞的分离:酶低温消化加刷洗法获得的气管上皮细胞数量较多,呈圆形,较大,悬浮旋转。②气管上皮细胞生长状态和形态特征:套皿接种细胞24h后,贴壁率约为60%,细胞增大,并进入分裂相。五六天后细胞增殖旺盛,部分无纤毛上皮细胞汇合呈多角形铺路石样相嵌生长,在相差显微镜下放大200~400倍清晰可见纤毛呈海葵样向心摆动活跃,第3周纤毛逐渐消失成遗迹,细胞凋亡。③纤毛细胞的电镜观察:可见纤毛由细胞顶膜伸出,大部分集结成束,除纤毛外,还有稠密的较细短的微绒毛由细胞顶膜伸出。④气道上皮细胞的免疫细胞化学鉴定:抗角蛋白单克隆抗体免疫组织化学染色阳性,细胞达(91&;#177;3)%。结论:酶消化法分离、无血清生长因子培养基培养,可以建立兔气管纤毛上皮细胞的原代培养模型,具有成为气管组织工程种子细胞的应用价值。
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关 键 词: | 细胞培养 纤毛上皮细胞 兔 原代培养 生物学特性 体外生长 |
文章编号: | 1671-5926(2006)01-0034-03 |
收稿时间: | 2005-08-24 |
修稿时间: | 2005-11-07 |
Biological characters of tracheal ciliated epithelial cells of primary culture in rabbits and the growth pattern in vitro |
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Abstract: | |
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