基于NF-κB信号通路的HTRF法筛选红豆杉中抗气道炎症有效活性成分研究

目的：运用均相时间分辨荧光（HTRF）检测方法，建立快速、稳定、高通量的抗炎药物细胞筛选模型，研究红豆杉中抗气道炎症有效活性成分。方法：采用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-1β(IL-1β)诱导支气管上皮细胞（HBE）建立炎症细胞模型，HTRF法检测细胞中Total核转录因子-κB(NF-κB)及Phospho NF-κB表达情况。通过考察不同细胞密度（10、25、50k/孔）、刺激时间（5、10、20、30、60、120、240min）及刺激浓度对NF-κB磷酸化的影响，筛选出最佳气道炎症细胞模型。同时给予红豆杉不同提取物孵育后，观察其对NF-κB磷酸化的影响。结果：TNF-α及IL-1β均能够诱导HBE中NF-κB发生明显磷酸化，其中TNF-α EC50为0.41ng/mL,IL-1β EC50为5.69ng/mL；当细胞密度在10～25k/孔，刺激时间在5～30min时，磷酸化水平较高。红豆杉紫杉烷类及挥发油类成分能够降低细胞中NF-κB磷酸化水平。结论：成功建立了快速、稳定、高通量的抗气道炎症药物细胞筛选模型，红豆杉紫杉烷类及挥发油类成分有明显的抗气道炎症作用，具有较好...