hVEGF165基因转染后兔骨髓间充质干细胞蛋白分泌功能及成骨活性的检测

目的:血管内皮细胞生长因子在血管再生和骨组织再生过程中起着重要的调节作用.观察hVEGF-165基因转染的兔骨髓间充质干细胞分泌VEGF的功能及转染后细胞的成骨活性.方法:(1)体外分离、培养兔骨髓间充质干细胞,纯化并鉴定兔骨髓间充质干细胞;免疫荧光法检测细胞表面标志;传代培养后以1μgPcDNA3.1-hVEGF165∶3μL阳离子脂质体Lipofectamine的比例转染,通过ELISA和Western-blot检测转染后细胞中外源性VEGF的表达.(2)测定在正常条件培养和成骨条件培养下,转染后细胞上清中碱性磷酸酶、骨钙素的水平.结果:(1)hVEGF165基因转染的骨髓间充质干细胞能成功分泌VEGF蛋白.(2)成骨条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的分泌量明显高于未转染组(P<0 05);而在正常条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的表达分泌量较低.结论:(1)采用基因转染技术可将hVEGF165基因转染到骨髓间充质干细胞中并可有效表达具有生物活性的VEGF.(2)在成骨条件培养下,转染hVEGF165基因后骨髓间充质干细胞的成骨能力增强.