| 人eNOS启动子不同序列驱动的红色荧光蛋白载体的构建与表达 |
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| 引用本文： | 邢飞跃,赵克森,李红乐,孙学刚,秦清和,王静珍,邓鹏,龚小卫,姜勇.人eNOS启动子不同序列驱动的红色荧光蛋白载体的构建与表达[J].中国病理生理杂志,2003,19(2):167-171. |
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| 作者姓名： | 邢飞跃 赵克森 李红乐 孙学刚 秦清和 王静珍 邓鹏 龚小卫 姜勇 |
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| 作者单位： | 第一军医大学全军休克微循环重点实验室, 广东 广州 510515 |
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| 基金项目： | 国家杰出青年科学基金 (3992 50 1 4 )，国家重点基础研究发展规划课题 (G2 0 0 0 0 570 0 4 )，国家自然科学基金重点项目 (30 0 30 0 60，39830 4 0 0 )，面上项目 (39970 1 90，30 870 735) |
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| 摘 要： | 目的:为了研究人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)启动子的功能,构建在哺乳动物细胞中表达的人eNOS启动子不同区段驱动的红色荧光蛋白报告基因载体。方法:从重组pDseNOSRed载体上将eNOS启动子的不同长度DNA序列亚克隆至红色荧光蛋白载体pDsRed1-1上,经PCR、酶切和DNA测序鉴定,将重组载体pDsF1033Red,pDsF494Red和pDsF166Red转染NIH3T3细胞,在倒置荧光显微镜下观察它们在细胞内的表达情况。结果:PCR、酶切和DNA测序结果均表明重组载体pDsF1033Red,pDsF494Red和pDsF166Red的构建正确,这些载体能在NIH3T3细胞中有效表达。由eNOS启动子不同区段驱动表达的95％以上的红色荧光蛋白均匀分布于整个细胞,转染后48-60h开始出现,96-144h为红色荧光蛋白(RFP)的表达高峰,RFP的荧光在144h最强,168h后红色荧光逐渐消退,21d后仍有很少量红色荧光残留。RFP的表达量和荧光强度明显低于强启动子pCMVIE驱动的RFP。结论:成功构建了eNOS启动子不同区段驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,它们能在哺乳动物细胞中有效表达,静息状态下呈现弱转录活性,为研究人eNOS启动子不同区及其顺式调控元件的作用提供了实用而又方便的工具。
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| 关 键 词： | 一氧化氮合酶 启动子 红色荧光蛋白 基因表达 |
| 文章编号： | 1000-4718(2003)02-0167-05 |
| 收稿时间： | 2002-10-28 |
Construction and expression of red fluorescent protein vectors containing different regions of human eNOS promoter |
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| XING Fei-yue,ZHAO Ke-sen,LI Hong-le,SUN Xue-gang,QIN Qing-he,WANG Jing-zhen,DENG Peng,GONG Xiao-wei,JIANG Yong.Construction and expression of red fluorescent protein vectors containing different regions of human eNOS promoter[J].Chinese Journal of Pathophysiology,2003,19(2):167-171. |
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| Authors: | XING Fei-yue ZHAO Ke-sen LI Hong-le SUN Xue-gang QIN Qing-he WANG Jing-zhen DENG Peng GONG Xiao-wei JIANG Yong |
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| Institution: | Key Lab. for Shock and Microcirculation of PLA, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Nitric-oxide synthase Promoter Red fluorescent protein Gene expression |
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