MAGE3 siRNA表达载体的构建及其沉寂作用

目的构建针对人MAGE3基因的小干扰RNA（siRNA）及其表达载体，转染细胞后观察其对MAGE3基因的干扰作用。方法设计MAGE3靶向的发夹状siRNA，依据设计合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接入pSUPER．neo载体，转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染胃癌细胞BGC823，采用RT-PCR检测MAGE3基因mRNA表达水平的变化。结果把针对MAGE3基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆到pSUPER．neo载体，经过酶切鉴定与测序，结果正确；稳定转染人胃癌细胞BGC823后，RT-PCR检测显示，MAGE3基因的表达水平明显降低。结论成功构建了针对MAGE3基因的siRNA载体，转染细胞后可抑制MAGE3基因表达。