人胎肝MSCs的分离培养及其类ESCs特性的研究

目的： 建立一种简便、有效且经济的分离人胎肝间充质干细胞(hFL-MSCs)的方法，在此基础上研究hFL-MSCs的类胚胎干细胞特性。方法: 利用二步离心及羟乙基淀粉沉淀法分离hFL-MSCs，根据不同类型细胞对培养瓶的不同黏附特性，通过多次传代纯化得到hFL-MSCs；用流式细胞仪检测hFL-MSCs的细胞周期及表面标志；用免疫细胞化学及RT-PCR检测AKP、hTERT、SSEA-4和Oct-3等胚胎干细胞标志在hFL-MSCs中的表达；在不同条件下，诱导hFL-MSCs向类神经元、成肌细胞及胰岛β样细胞分化并加以鉴定。结果: 从人胎肝中分离、纯化得到MSCs，P3代hFL-MSCs有91.2%处于G0/G1期；hFL-MSCs高表达CD29和CD44，不表达造血细胞标志CD34和CD45，极低表达与GVHD相关的HLA-DR、CD80、CD86和CD106；hFL-MSCs表达Oct-4、SSEA-4、AKP和hTERT等胚胎干细胞标志；在不同诱导条件下，hFL-MSCs可分化为类神经元、肌样细胞以及胰岛β样细胞。结论: 二步离心联合羟乙基淀粉沉淀法是一种简便、高效且低成本的分离hFL-MSCs的方法；hFL-MSCs具有类胚胎干细胞的特性，体外诱导可向3个胚层来源的细胞分化，且免疫原性弱, 是组织工程和细胞治疗较为理想的种子细胞。

The isolation of MSCs from human fetal liver by two-step centrifugation with HES sedimentation and their ESCs-like characterizations