5'上游序列对TNFα诱导内皮细胞血小板源生长因子-B链基因转录的调控作用

目的和方法:为探讨人血小板源生长因子(PDGF)-B链基因5'上游序列在TNFα诱导内皮细胞该基因转录中的调控作用,本研究将构建的一系列含人PDGF-B链基因不同上游序列荧光素酶报告基因质粒,与内参照质粒pSV-β-Gal共转染培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分别检测了不同浓度和不同持续时间TNFα作用下转染内皮细胞荧光素酶比活性,观察了5'上游序列的定向删切对TNFα诱导内皮细胞PDGF-B链基因转录的影响.结果和结论:不同浓度TNFα处理转染(重组报告基因质粒pSIS-1758/+43Luc)内皮细胞18h,荧光素酶的表达均有增加,在TNFα为200U/mL、400 U/mL和800 U/mL时,荧光素酶活性呈浓度依赖性增加(分别为P＜0.05,P＜0.05和P＜0.01);200U/mL TNFα分别处理9 h、18 h、36 h和72 h后,内皮细胞荧光素酶均有增加,自18 h开始其荧光素酶的表达量呈时间依赖性增加(分别为P＜0.05,P＜0.05和P＜0.01);在PDGF-B链基因上游序列-1758/+43 bp,-402/+43 bp或-189/+43 bp存在下,TNFα可使转染内皮细胞荧光素酶表达量明显增加,而在-84/+43 bp和-52/+43 bp存在时TNFα组与对照组荧光素酶表达量无明显差异,提示PDGF-B链基因上游序列-189/-85 bp范围内存在TNFα诱导反应的顺式调控元件.