益气活血方体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞的分化

背景：既往研究证明益气活血方补阳还五汤具有抑制脑缺血及再灌注模型细胞凋亡、抗自由基等作用，但关于本方剂对干细胞分化影响的报道较少。目的：观察益气活血方体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。设计、时间及地点：以细胞为对象，对比观察实验，于2006-03/2008-02在河南省中医药研究院国家中医管理局三级实验室进行。材料：清洁级一二月龄SD大鼠20只，雌雄各半，体质量100~150 g。益气活血方由本院制剂室生产，选用当归60 g，桃仁30 g，川芎30 g加水720 mL，提取挥发油，备用。药渣及提取液加入黄芪1 200 g，赤芍60 g，地龙30 g，红花30 g，再加入920 mL水，煎煮1 h，滤过，药渣再加入8 640 mL水，煎煮1 h，滤过，合并2次煎液，浓缩至600 mL，加入挥发油及吐温-80 3 mL，混匀，装瓶进行高压高温消毒。每毫升相当于生药2.4 g。方法：采用密度梯度离心法分离获取SD大鼠骨髓单个核细胞层，将细胞经过传代培养使骨髓间充质干细胞得到扩增和纯化。将第10代的细胞悬液接种于直径40 mm塑料培养皿中，细胞生长达80%~90%融合时，加入含体积分数为0.10的FBS、碱性成纤维细胞生长因子的DMEM培养基培养24 h，益气活血方组而后换为含诱导液二甲亚砜、丁羟茴醚、β-巯基乙醇、益气活血方诱导 5 h，对照组换为含诱导液二甲亚砜、丁羟茴醚、β-巯基乙醇诱导5 h。主要观察指标：采用流式细胞仪鉴定骨髓间充质干细胞；用免疫细胞化学方法检测诱导后细胞巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白的表达。结果：经流式细胞仪检测显示，细胞表面标志CD90、CD106阳性，CD45、CD34呈阴性。免疫细胞化学方法检测显示，益气活血方组在诱导1，3 h分化巢蛋白细胞与诱导5 h分化的神经元特异性烯醇化酶细胞和胶质纤维酸性蛋白细胞，与对照组相比，差异显著（P < 0.01）。结论：益气活血方具有体外定向诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。

Yiqihuoxue recipe induces differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells towards