| 人源抗Rh(D)单链抗体基因的克隆和表达 |
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| 引用本文： | 岳建华,潘秀珍,王长军,李先富,唐家琪.人源抗Rh(D)单链抗体基因的克隆和表达[J].医学研究生学报,2006,19(4):298-302. |
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| 作者姓名： | 岳建华 潘秀珍 王长军 李先富 唐家琪 |
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| 作者单位： | 南京军区军事医学研究所,江苏,南京,210002 |
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| 基金项目： | 中国科学院资助项目;江苏省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:构建人源抗红细胞Rh(D)抗原单链噬菌体抗体库。方法:应用噬菌体展示技术,从分泌抗Rh(D)抗体的细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA第一条链,多次PCR扩增和克隆抗体可变区基因(VH/VLcDNA),经重叠延伸拼接(SOE)用编码连接肽(Gly4Ser)3的互补序列组成scFv基因,经酶切克隆入载体pCANTAB5E,使之呈现于噬菌体表面。使用完整Rh+型红细胞进行四轮淘汰筛选,ELISA对所获抗体进行初步鉴定。结果:构建的噬菌体抗体库库容为1.2×107,噬菌体DNA中全长scFv基因的插入率为0.80,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为3×108pfu/ml的初级噬菌体抗体库。以完整Rh+型红细胞进行四轮淘汰筛选,出现特异性富集。经DotELISA实验鉴定,得到1株与Rh+型红细胞特异结合的scFv噬菌体抗体。结论:运用噬菌体抗体库技术构建了人源抗红细胞Rh(D)抗原的噬菌体抗体库,为进一步对所获克隆株进行序列分析、可溶性抗体表达和纯化奠定了基础。
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| 关 键 词： | Rh(D)抗原 scFv基因 噬菌体展示技术 |
| 文章编号： | 1008-8199(2006)04-0298-04 |
| 修稿时间： | 2006年2月16日 |
Cloning and expression of human anti-Rh(D) single-chain Fv fragment |
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| YUE Jian-hua,PAN Xiu-zhen,WANG Chang-jun,LI Xian-fu,TANG Jia-qi.Cloning and expression of human anti-Rh(D) single-chain Fv fragment[J].Bulletin of Medical Postgraduate,2006,19(4):298-302. |
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| Authors: | YUE Jian-hua PAN Xiu-zhen WANG Chang-jun LI Xian-fu TANG Jia-qi |
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| Keywords: | Rh(D) antigen scFv genes Phage display technology |
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