巨噬细胞移动抑制因子活性抑制肽的筛选和鉴定 |
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引用本文: | 单志新,余细勇,林秋雄,符永恒,邓春玉,林曙光.巨噬细胞移动抑制因子活性抑制肽的筛选和鉴定[J].中国病理生理杂志,2005,21(8):1646-1646. |
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作者姓名: | 单志新 余细勇 林秋雄 符永恒 邓春玉 林曙光 |
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作者单位: | 广东省人民医院,医学研究中心,广东,广州,510080 |
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摘 要: | 目的:巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)参与了多种病理生理过程,如多种类型的感染以及关节炎、肾小球肾炎等自身免疫疾病以及动脉粥样硬化的发生、形成过程。本文将利用酵母双杂交技术从预制随机肽库中筛选能有效抑制MIF活性的多肽,为研制MIF活性抑制剂提供候选分子。方法:利用亚克隆技术,构建“诱饵”载体pGBKT7-MIF。将pGBKT7-MIF与预制随机肽库质粒DNA共转化酵母Y190,进行酵母双杂交实验。从SD/-Leu/-His/-Trp/+3-AT板上挑取阳性酵母克隆,扩增并提取阳性克隆的质粒DNA,再与pGBKT7-MIF行酵母双杂交以排除假阳性克隆。测定获得的克隆质粒上短肽的编码序列,并分别人工合成一定量的短肽。利用巨噬细胞移动抑制实验和血管内皮细胞成管腔实验测定短肽对MIF活性的抑制作用。
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关 键 词: | 巨噬细胞移动抑制因子 抑制肽 活性 酵母双杂交技术 筛选 亚克隆技术 质粒DNA 鉴定 factor |
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