| 利用SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测大鼠P物质mRNA方法的建立 |
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| 引用本文： | 于挺敏,姚刚. 利用SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测大鼠P物质mRNA方法的建立[J]. 吉林大学学报(医学版), 2008, 34(6): 1086-1088. DOI: 吉林省科技厅基金资助课题（200705238） |
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| 作者姓名： | 于挺敏 姚刚 |
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| 作者单位： | （吉林大学第二医院神经内科，吉林 长春 130041） |
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| 基金项目： | 吉林省科技厅基金资助课题 |
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| 摘 要： | 目的：建立检测大鼠P物质（SP）mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法，为检测大鼠SP基因表达提供有效的手段。方法：提取大鼠中脑总RNA，扩增SP基因片段，将其克隆入pMD-18T载体，制作标准品质粒；应用SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料，对连续稀释的标准品质粒进行实时PCR分析，评价所建立方法的检测灵敏度；对PCR产物进行溶解曲线分析评价其特异性。结果：标准品质粒构建成功，经酶切及测序鉴定，目的片段已插入pMD-18T载体；所建立的实时定量PCR方法的最低检测限度为104个拷贝/反应，在每反应104～109拷贝范围内，Ct值（荧光信号达到设定阈值所经历的循环数）与起始模板浓度具有良好的线性关系，r=0.998。结论：所建立的检测大鼠SP mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法具有敏感性高、特异性强和线性范围广等特点，适用于对大鼠各种组织SP的大量样本检测。
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| 关 键 词： | SYBR Green Ⅰ P物质 |
| 收稿时间： | 2008-06-16 |
Development of real-time PCR assay for detection and quantitation of substance P mRNA in rats using SYBR Green Ⅰ |
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| YU Ting-min,YAO Guang. Development of real-time PCR assay for detection and quantitation of substance P mRNA in rats using SYBR Green Ⅰ[J]. Journal of Jilin University: Med Ed, 2008, 34(6): 1086-1088. DOI: 吉林省科技厅基金资助课题（200705238） |
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| Authors: | YU Ting-min YAO Guang |
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