| 天然人源IgG Fab噬菌体抗体库的构建及多样性分析 |
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| 引用本文： | 邵红霞,章黎,杨彬,冯萌,付永峰,程训佳. 天然人源IgG Fab噬菌体抗体库的构建及多样性分析[J]. 中国免疫学杂志, 2010, 26(11). DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2010.11.010 |
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| 作者姓名： | 邵红霞 章黎 杨彬 冯萌 付永峰 程训佳 |
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| 作者单位： | 1. 复旦大学上海医学院病原生物学系,上海,200032
2. Department of Infectious Diseases, Tokai University School of Medicine, Isehara,Kanagawa 259-1193, Japan |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，上海市基础研究重点项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建天然人源IgGFab噬菌体抗体库并分析来源于健康人外周血B淋巴细胞的抗体基因可变区的多样性及优势选择。方法:以DNA重组技术从300名健康志愿者的外周血淋巴细胞中扩增出全套人抗体轻链及重链Fd基因,分别插入噬菌体载体pFabICN相应位置,构建天然人源免疫球蛋白G基因文库;进一步从抗体库中随机挑选克隆,获得重轻链基因进行核苷酸序列测定并利用IgBLAST数据库分析抗体基因可变区的同源家族。结果:从4×108库容的天然人源IgGFab噬菌体抗体库中随机挑选克隆,对其中32个轻链及重链Fd基因插入正确的克隆进行核苷酸序列测定和氨基酸序列的推算,获得29条彼此完全不同的Fd重链基因及轻链基因。以IgBLAST数据库比对分析显示29条重链基因的V区分别属于VH3(72.4%),VH1(10.3%),VH4(6.9%),VH5(6.9%)和VH7(3.4%)基因家族。29条轻链基因分别属于Vκ1(44.8%),Vκ2(15.4%),Vκ3(11.5%),Vκ4(23.1%)基因家族和Vλ1(11.5%)基因家族。结论:以300份健康人外周血淋巴细胞的抗体基因构建的天然人源IgGFab噬菌体抗体库基因多样性良好,重链VH3基因家族存在优势表达。
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| 关 键 词： | 噬菌体展示库 免疫球蛋白Fab片段 免疫球蛋白重链基因 抗体多样性 |
Construction and diversity analysis of a na(i)ve human phage-displayed Fab library |
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| SHAO Hong-Xia,ZHANG Li,YANG Bin,FENG Meng,FU Yong-Feng,Hiroshi Tachibana,CHENG Xun-Jia. Construction and diversity analysis of a na(i)ve human phage-displayed Fab library[J]. Chinese Journal of Immunology, 2010, 26(11). DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2010.11.010 |
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| Authors: | SHAO Hong-Xia ZHANG Li YANG Bin FENG Meng FU Yong-Feng Hiroshi Tachibana CHENG Xun-Jia |
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