| 乳腺癌耐药蛋白(BCRP)高表达耐药细胞系的建立及其耐药机制的初步研究 |
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| 引用本文： | 张会来,孙燕,宋拯,刘贤明,王华庆. 乳腺癌耐药蛋白(BCRP)高表达耐药细胞系的建立及其耐药机制的初步研究[J]. 中国肿瘤临床, 2009, 36(13). DOI: 10.3969/j.issn.1000-8179.2009.13.014 |
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| 作者姓名： | 张会来 孙燕 宋拯 刘贤明 王华庆 |
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| 作者单位： | 乳腺癌防治教育部重点实验室,天津市肿瘤防治重点实验室,天津医科大学附属肿瘤医院淋巴瘤科,天津市,300060 |
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| 摘 要： | 目的:建立稳定表达乳腺癌耐药蛋白(Breast cancer resistance protein,BCRP)的小鼠成纤维细胞系PA317/BCRP,初步探讨其耐药机制.方法:从乳腺癌耐药细胞系MCF-7/ADR中克隆BCRP基因.将编码序列克隆导入真核表达载体pcDNA3.1,转化感受态E.Coli DH5α,获得重组质粒pcDNA3.1/BCRP,酶切并测序鉴定.用电穿孔法将质粒转染PA317细胞,同时转染pcDNA3.1/EGFP.G418筛选阳性克隆.阳性转染细胞提取细胞总RNA,RT-PCR检测BCRP的mRNA表达.Western blot检测BCRP蛋白表达.MTT法检测耐药克隆PA317/BCRP细胞对米托蒽醌(Mitoxantrone,MTZ)耐药性,罗丹明123外排实验验证转染后细胞外排罗丹明123功能.Western blot检测P13K-AKT信号转导通路下游靶点AKT表达变化.结果:构建质粒pcDNA3.1/BCRP,转染PA317细胞,G418筛选.RT-PCR和Westem blot,均检测到细胞中BCRP基因转录及蛋白表达.与空质粒转染细胞、未转染细胞时照组相比,PA317/BCRP细胞对MTZ耐药性增强,且外排罗丹明123能力增强.检测P13K-AKT途径下游靶点AKT蛋白磷酸化水平在PA317/BCRP细胞内明显增高.结论:1、成功获得稳定表达BCRP的PA317细胞系-PA317/BCRP,经MTT和罗丹明123外排实验证实,其耐药和外排功能增强.2、检测PA317/BCRP细胞P13K-AKT途径下游靶点AKT的表达,观察到耐药细胞的AKT表达含量明显高于转染空质粒和未转染的PA317细胞.推测BCRP可能通过影响AKT表达上调发挥其耐药作用.
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| 关 键 词： | 乳腺癌耐药蛋白 转染 PA317细胞 耐药 信号转导 |
Establishment of Cell Line with High Expression of BCRP and Basic Research on Drug-resistant Mechanism |
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| ZHANG Huilai,SUN Yan,SONG Zheng,LIU Xianming,WANG Huaqing. Establishment of Cell Line with High Expression of BCRP and Basic Research on Drug-resistant Mechanism[J]. Chinese Journal of Clinical Oncology, 2009, 36(13). DOI: 10.3969/j.issn.1000-8179.2009.13.014 |
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| Authors: | ZHANG Huilai SUN Yan SONG Zheng LIU Xianming WANG Huaqing |
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