| Decorin基因过表达对HEK293T细胞微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1表达的影响 |
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| 引用本文： | 赵婷婷,古艳婷,李平,朱斌,董晞,张浩军.Decorin基因过表达对HEK293T细胞微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1表达的影响[J].中日友好医院学报,2012,26(6). |
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| 作者姓名： | 赵婷婷 古艳婷 李平 朱斌 董晞 张浩军 |
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| 作者单位： | 1. 中日友好医院临床医学研究所药物药理室,北京,100029
2. 中日友好医院临床医学研究所药物药理室,北京100029;北京协和医学院,北京100730 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，中日友好医院课题 |
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| 摘 要： | 目的:构建人核心蛋白聚糖(DCN)重组质粒,研究其对微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1表达的影响.方法:从人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)提取总RNA,经RT-PCR获得decorin的全长cDNA,克隆至T-载体pUM-T并测序,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,再次测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293T细胞,利用RT-PCR、Western Blot方法检测空载体组和重组质粒转染组微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1转录水平及翻译水平的表达.结果:经DNA测序证实人DCN cDNA片段正确插入真核表达载体中.Western Blot结果显示经磷酸钙共沉淀法转染的HEK 293T细胞中目的基因高表达.RT-PCR和Western Blot结果显示,与空载体组相比,重组质粒转染组LC3转录水平显著降低,beclin1和LC3-Ⅱ的翻译水平均显著降低.结论:成功构建人DCN重组质粒,其在HEK 293T中过表达可以显著降低微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1表达,为进一步研究DCN与自噬的相互作用奠定了基础.
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| 关 键 词： | 核心蛋白聚糖 自噬 微管相关蛋白轻链3 beclin1 |
Overexpression of human decorin influencing LC3 and beclin1 expression in HEK 293T cells |
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| Abstract: | |
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