| 血管生成素与绿色荧光蛋白融合蛋白的表达及纯化 |
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| 引用本文： | 李凌云,许正平. 血管生成素与绿色荧光蛋白融合蛋白的表达及纯化[J]. 南京医科大学学报(自然科学版), 2005, 25(7): 437-442 |
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| 作者姓名： | 李凌云 许正平 |
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| 作者单位： | 南京医科大学细胞生物学与医学遗传学系,江苏,南京,210029;浙江大学医学院公共卫生系,浙江,杭州,310031 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30171035) |
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| 摘 要： | 目的:表达并纯化血管生成素(ANG)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白,以进一步探讨血管生成素的生物学功能。方法:PCR扩增人ANG基因,将其与EGFP基因融合后克隆到高表达载体pMFHT,构建了原核表达质粒pHIS鄄ANG鄄EGFP。该质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并用金属螯合亲和层析纯化目的蛋白。激光共聚焦显微镜和Westernblot鉴定融合蛋白的表达情况。结果:重组蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并从破菌上清中一步纯化目的蛋白,纯度可达95%以上。Westernblot分析表明表达产物具有良好的抗原性和特异性。诱导表达的菌体在激光共聚焦显微镜下可发射明亮的绿色荧光。结论:成功的表达并纯化了ANG鄄EGFP融合蛋白,利用EGFP的荧光示踪作用,该融合蛋白可用于血管生成素核转位和胞内共定位蛋白质研究。
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| 关 键 词： | 血管生成素 增强型绿色荧光蛋白 免疫印迹分析 金属螯合亲和层析 融合表达 |
| 文章编号： | 1007-4368(2005)07-0437-06 |
| 修稿时间： | 2004-11-01 |
Expression and purification of angiogenin-EGFP fusion protein in E.coli |
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| LI Ling-yun,XU Zheng-ping. Expression and purification of angiogenin-EGFP fusion protein in E.coli[J]. Acta Universitatis Medicinalis Nanjing, 2005, 25(7): 437-442 |
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| Authors: | LI Ling-yun XU Zheng-ping |
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| Affiliation: | LI Ling-yun,XU Zheng-ping1* |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | angiogenin enhanced green fluorescent protein Western blotting Ni-NTA affinity chromatography fusion expression |
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