慢病毒介导不同启动子嵌合抗原受体CD19在T细胞中的表达

目的 高效包装含绿色荧光蛋白（GFP）的嵌合性抗原受体CD19重组慢病毒载体，对比不同启动子在T细胞中绿色荧光蛋白的表达效率。方法 构建3种不同启动子及CD19-CAR的质粒pHAGE-CMV-EF1α-GFP-CD19、pHAGE-CMV-GFP-CD19、pHAGE-EF1α-GFP-CD19，转染293T细胞，镜下观察转染的细胞状态，72h后收集上清，PCR定量病毒载体RNA核酸拷贝数，通过流式细胞术以及Western blot法测定单、双启动子启动GFP及CD3ζ的表达情况；慢病毒液分别转染T淋巴细胞后，通过荧光显微镜检测慢病毒转染效果，Western blot法测定蛋白的表达水平。结果 荧光显微镜观察：以293T细胞为靶细胞时，启动子由强到弱依次为CMV-EF1α > CMV > EF1α，流式结果显示，在293T细胞中的转导率分别为72.4%、20.6%、14.5%；Western blot法检测结果显示，在T细胞中启动子表达强弱为CMV-EF1α > EF1α > CMV。结论 在以重组慢病毒为载体的基因研究过程中，为了提高病毒在感染细胞的转染率，需要正确选择启动子以及相应的靶细胞。

Comparision of the Efficiency of Different Promoters Driving the Expression of CD19-specifc Chimeric Antigen Receptor (CAR)-redirected T Lymphocytes Mediated by Lentiviral Vector