防污染PCR-微孔板杂交检测布鲁氏菌方法研究

目的 建立防污染PCR—微孔板杂交—EIA检测技术，并用于布鲁氏菌及其模拟感染组织中细菌的检测。方法 根据布鲁氏菌31kD热休克蛋白和外膜蛋白2B(OMP2B)基因设计引物，筛选合适引物，并建立用服嘧啶糖基化酶防污染的PCR扩增—微孔板杂交与酶联显色检测布鲁氏菌的方法，并用于模拟污染布鲁氏菌动物脏器标本的检测。结果 根据布鲁氏菌31kD热休克蛋白和外膜蛋白2B基因设计的引物，建立了复合PCR，同时检测2个基因的存在，并发现不同引物序列对PCR扩增敏感性影响较大，可以相差1000倍。用0．5U的UDG可以防止10^8产物的污染，微孔板杂交—酶联显色检测比单纯PCR—电泳敏感10倍。将该体系用于污染动物脏器的检测，可以检测出反应体系中2—200个细菌的存在。结论 研究的防污染PCR—微孔板杂交—EIA试剂克服了目前PCR试剂运输不便、产物污染所致假阳性和判定结果欠客观的缺点，为布鲁氏菌的快速检测提供了一个有力手段。

Anti-contamination PCR-microplate hybridization-enzyme immunoassay for detecting Brucella spp