| 摘 要： | 目的:初步探讨缺氧/复氧(H/R)损伤过程心肌细胞株H9C2中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser633磷酸化水平的变化及其可能的调控机制。方法:采用缺氧4h培养后恢复常氧条件培养12、16或24h造成H9C2细胞H/R损伤。选取缺氧4h/复氧12h(H4/R12)进行后续实验。(1)H/R后用钙离子泵抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG),1.0×10~(-6) mol/L处理细胞1h;用PI3K/Akt抑制剂LY294002(5.0×10~(-5) mol/L)预处理1h,再进行H/R及TG处理1h。(2)用PP2A/PP1抑制剂冈田酸Okadaic acid(OA)低剂量(5×10~(-8) mol/L)、高剂量(1×10~(-6) mol/L)预处理细胞30 min,再进行H/R。用Western blot检测eNOS总蛋白及eNOS Ser633磷酸化水平,化学比色法检测培养基中一氧化氮(NO)含量。结果:(1)H/R损伤后心肌细胞eNOS Ser633磷酸化水平降低(P0.05);TG明显上调eNOS Ser633磷酸化水平(P0.05),LY294002预处理可抑制TG的上调作用(P0.05);低剂量OA、高剂量OA预处理均可上调H/R损伤后eNOS Ser633磷酸化水平(P0.05),且高、低剂量组间无明显差异。(2)H/R损伤后培养基中NO含量减少(P0.05);TG、低剂量OA、高剂量OA处理均可增加H/R损伤后培养基中NO含量(P0.05)。结论:H/R损伤可明显降低H9C2细胞中eNOS Ser633水平,这可能是由于H/R过程中既有PI3K/Akt通路被抑制,又有PP2A活性增强所致。
|
