| 人血管生成抑制因子canstatin基因的克隆及真核表达 |
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| 作者姓名： | 单志新 林秋雄 余细勇 刘媛 符永恒 谭虹虹 郑猛 林曙光 |
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| 作者单位： | 广东省心血管病研究所分子药理室,广州,510080;广东省人民医院医学研究中心,广州,510080 |
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| 基金项目： | 广东省自然科学基金，广东省自然科学基金，广东省科技厅科技计划，广东省卫生厅科研项目 |
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| 摘 要： | [目的]为研究canstatin对动脉粥样硬化斑块的稳定作用,克隆人canstatin基因,并在COS7细胞中表达出具有生物活性的canstatin.[方法]利用RT-PCR技术,从人脐静脉血管内皮细胞中扩增canstatincDNA,并定向克隆入真核表达载体pSecTag2C中.用脂质体转染法,将重组质粒pSecTag2C-canstatin转入COS7细胞.培养48h后,对转化的COS7细胞行PCR和Western-blot鉴定,用MTT法检测canstatin对人脐静脉血管内皮细胞增殖的抑制作用.[结果]从人脐静脉血管内皮细胞中扩增出canstatincDNA片段.测序结果显示,克隆的canstatincDNA长684bp,序列与文献报道一致.从pSecTag2C-canstatin转化的COS7细胞中能特异地扩增出canstatin基因片段,Western-blot结果显示,转化的COS7细胞中有特异的34kDa的canstatin表达.MTT检测显示,表达canstatin的COS7细胞上清能呈剂量依赖性地抑制脐静脉血管内皮细胞的增殖.[结论]构建了真核表达重组质粒pSecTag2C-canstatin,在COS7中表达出具有生物活性的人canstatin.
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| 关 键 词： | 克隆,分子 基因表达 |
| 文章编号： | 1672-3554(2004)3S-0004-03 |
| 修稿时间： | 2004-03-10 |
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