5-氮杂胞苷诱导兔骨髓间充质细胞分化为心肌样细胞的实验

目的：探讨5-氮杂胞苷诱导兔骨髓间充质细胞体外分化为肌细胞的可能性。方法：实验于2002-10／2003-03在西京医院心脏内科实验室完成。穿刺法抽取成年新西兰兔双侧股骨骨髓，分离培养骨髓间充质细胞，通过不同浓度的5-氮杂胞苷诱导24h后，继续培养3周，收集生长良好的诱导后7，14，2l，28d的骨髓间充质细胞，以及第3代乳鼠心肌细胞做Western blot检测。10μmol／L5-氮杂胞苷诱导分化3周的间充质细胞经胰酶消化后接种在多聚赖氨酸包被的无菌盖玻片上做细胞爬片，CO2孵箱中培养48h后取出，磷酸盐缓冲液冲洗后加横纹肌α-肌动蛋白单抗室温孵育1h，洗涤后加入Cy3标记的羊抗鼠抗体，在37℃下摇床孵育1h，荧光显微镜下拍照。取诱导后3周处于对数生长期的细胞．制成超薄切片，铀一铅双染色，透射电镜下观察照相。结果：①倒置相差显微镜下观察5-氮杂胞苷诱导10d后可见细胞部分变成多角形状，14d后可见趋于融合的多核肌管样细胞结构。②Westem blot检测横纹肌α-肌动蛋白在乳鼠心肌细胞和10μmol／L 5-氮杂胞苷诱导后14，2l，28d的兔间充质细胞中均有表达，心肌细胞的阳性条带最粗，其次为诱导后21d和28d的细胞，诱导后14d的细胞阳性条带最淡，诱导后7d的细胞未见阳性条带。⑧诱导后21d，10μmol／L 5-氮杂胞苷处理的间充质细胞经横纹肌α-肌动蛋白免疫细胞荧光染色部分细胞呈阳性反应，提示有肌样细胞特性。④透射电镜检查局部放大示胞浆内有明显的Z线物质，之间有肌丝团样结构，构成类似原始的肌小节样结构。结论：成年兔骨髓间充质细胞在5-氮杂胞苷诱导下可向肌细胞分化，未分化为跳动的心肌样细胞。

Experiment on rabbit bone marrow stromal cells differentiating into myocardium-like cells induced by 5-azacytidine