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HCV非结构蛋白NS5A基因的斑马鱼肝脏表达模型
引用本文:赵晔,胡占英,佟军威,赵立勋,蒋建东,张靖溥. HCV非结构蛋白NS5A基因的斑马鱼肝脏表达模型[J]. 中国医药生物技术, 2011, 6(6): 10-444. DOI: 10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2011.06.010
作者姓名:赵晔  胡占英  佟军威  赵立勋  蒋建东  张靖溥
作者单位:中国医学科学院医药生物技术研究所药理室, 北京,100050
基金项目:国家自然科学基金面上项目,"重大新药创制"科技重大专项
摘    要:目的建立HCV非结构蛋白NS5A基因在斑马鱼肝脏特异表达的模型,研究HCVNS5A的体内作用机制并初步探讨HCVNS5A对肝病理标志基因表达的影响。方法克隆肝基因表达调控序列——斑马鱼脂肪酸结合蛋白基因增强子序列(eFABP)和HCV非结构蛋白基因NS5A序列,利用CMV启动子序列,构建HCVNS5A基因和报告基因绿色荧光蛋白基因eGFP在肝脏共表达的基因构件pFC-5AiR。经细胞转染实验验证所建构件的报告基因DsRed表达红色荧光蛋白后,将该基因构件线性化并经显微注射导入斑马鱼胚胎;通过荧光显微镜观察和整体原位杂交技术对目的基因NS5A的表达进行定位,验证其肝脏特异性表达。采用RT-PCR方法和westernblot方法对HCVNS5A基因的转录和翻译水平进行检测;并检测肝脏病理相关的标志基因的转录水平变化。结果细胞转染实验证明基因构件pFC一5AiR的报告基因DsRed能够在肝癌细胞Huh7中表达;斑马鱼胚胎注射该基因构件后在肝脏能够观察到红色荧光蛋白基因DsRed的表达;RT-PCR和westemblot结果显示HCV基因NS5A能够在斑马鱼体内正确表达;原位杂交结果进一步证明了NS5A的表达集中在斑马鱼肝脏内。进一步RT-PCR检测表明HCVNS5A在斑马鱼体内的表达可导致一些肝代谢和纤维化相关基因的上调,如Adiponectin、LDLR、Argsyn、TGF-β和HMGR等,推测NS5A在肝脏脂肪病变和纤维化中具有一定作用。结论成功建立了斑马鱼肝脏表达HCVNS5A的模型;初步数据表明HCVNS5A在斑马鱼体内的表达与部分肝代谢和纤维化标志基因的异常表达相关;该模型可以用于HCVNS5A的体内病理机制的研究。

关 键 词:肝炎病毒属  斑马鱼  疾病模型  动物  基因表达

A zebrafish model for liver-specific expression of HCV NS5A gene
ZHAO Ye,HU Zhan-ying,TONG Jun-wei,ZHAO Li-xun,JIANG Jian-dong,ZHANG Jing-pu. A zebrafish model for liver-specific expression of HCV NS5A gene[J]. Chinese Medicinal Biotechnology, 2011, 6(6): 10-444. DOI: 10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2011.06.010
Authors:ZHAO Ye  HU Zhan-ying  TONG Jun-wei  ZHAO Li-xun  JIANG Jian-dong  ZHANG Jing-pu
Affiliation:ZHAO Ye,HU Zhan-ying,TONG Jun-wei,ZHAO Li-xun,JIANG Jian-dong,ZHANG Jing-pu:Department of pharmacology,Institute of Medicinal Biotechnology,Chinese Academy of Medical Sciences,Beijing 100050,China
Abstract:Objective To establish a zebrafish model for liver-specific expression of HCV non-structural protein NS5A,and to explore the effects of HCV NS5A on liver pathological marker genes in vivo.Methods Liver-specific gene expression regulating element zebrafish fatty acid binding protein enhancer(eFABP) sequence and HCV NS5A was cloned.By ligating the eFABP,CMV promoter,NS5A,the IRES of encephalomyocarditis virus(EMCV) and DsRed in turn,a liver-specific gene expression vector pFC-5AiR was constructed.Reporter gen...
Keywords:Hepatitis  Zebrafish  Disease models  animal  Gene expression  
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