神经干细胞的单层培养及分化过程中ＨＥＳ１和ＭＡＳＨ１的表达变化

摘 要： 【目的】 建立神经干细胞（ＮＳＣ）体外培养方案，使ＮＳＣ的体外可以得到增殖和分化，并检测ＮＳＣ分化过程中ＨＥＳ１和ＭＡＳＨ１的表达变化。【方法】无菌条件下取ＳＤ大鼠胚胎端脑，无血清悬浮培养，形成Ｐ２代神经球后，将神经球消化成单细胞，分为神经球悬浮培养和单层贴壁培养，并对两种不同培养方式下的ＮＳＣ进行干性鉴定和分化能力鉴定。用不同浓度（２０、４０、８０ μｇ／Ｌ）的脑源性神经生长因子（ＢＤＮＦ）诱导ＮＳＣ分化，选出最合适的浓度。用ＢＤＮＦ最佳诱导浓度诱导ＮＳＣ分化，Ｑ－ＰＣＲ检测分化过程中ＨＥＳ１和ＭＡＳＨ１的表达变化。【结果】神经球悬浮培养和单层贴壁培养均可得到的ＮＳＣ；分化３ ｄ后，在不加入任何诱导因素的情况下，单层贴壁培养的ＮＳＣ能更高比例［（１９．５５ ± １．０９）％］地分化为β－ｔｕｂｕｌｉｎ Ⅲ阳性细胞；ＢＤＮＦ ４０ μｇ／Ｌ能诱导出更多的β－ｔｕｂｕｌｉｎ Ⅲ阳性细胞［（３４．１７ ± ０．６０）％］；在分化１、３ 和７ ｄ时，Ｑ－ＯＣＲ结果表明ＭＡＳＨ１在ＢＤＮＦ诱导下组较ＮＳＣ和对照组表达水平明显上升。【结论】单层贴壁培养的神经干细胞更利于分化为神经元，ＢＤＮＦ为４０ μｇ／Ｌ时能诱导出更高比例的神经元，ＢＤＮＦ可以诱导ＭＡＳＨ１在ＮＳＣ分化过程中表达明显上升。