乙肝病毒HBx基因荧光真核表达质粒的构建与鉴定 |
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引用本文: | 邬国斌,连芳,梁安民.乙肝病毒HBx基因荧光真核表达质粒的构建与鉴定[J].广西医科大学学报,2010,27(3):357-360. |
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作者姓名: | 邬国斌 连芳 梁安民 |
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作者单位: | 1. 广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科,南宁,530021 2. 广西医科大学生理学教研室,南宁,530021 |
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摘 要: | 目的:克隆乙肝病毒HBx基因及构建增强型绿色荧光蛋白-HBx基因(pEGFP—N1-HBx)荧光真核表达质粒并进行表达鉴定。方法:以CH—HEP-1肝癌细胞株基因组DNA为模板PCR法扩增HBx基因,PCR产物测序分析正确后克隆至真核表达载体pEGFP—N1,命名为pEGFP—N1-HBx。将该质粒转染肝细胞株HepG2以RT-PCR及荧光显微镜检测其表达情况。结果:酶切鉴定和序列分析证实构建质粒含HBx基因,RT-PCR检测和荧光显微镜观察表明构建的pEGFP—N1-HBx在肝癌细胞株HepG2真核细胞中表达,且其绿色荧光蛋白瞬时表达率为20%~30%。结论:HBx基因克隆及其真核表达载体pEGFP—N1-HBx构建成功,可用于肝癌发生发展的生物学研究。
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关 键 词: | HBx基因 质粒 绿荧光蛋白 肝癌细胞 |
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