抗HIV-1 p24 单克隆抗体的制备、特性鉴定及初步应用

目的：制备抗HIV-1p24单克隆抗体（mAb）及特性鉴定。方法：采用细胞融合技术制备可稳定分泌抗HIV-1p24mAb的杂交瘤细胞。选择高效价、识别不同抗原表位的mAb纯化后，分别包被ELISA板及作为酶标记mAb，建立双mAb夹心ELISA法，检测400份正常人血浆，20份抗HIV抗体阳性（p24抗原阴性）的血浆，20份HIV-1感染的细胞培养上清及HIV-1p24抗原国家参考品，并同时用进口p24抗原检测试剂盒进行对比检测。结果：经细胞融合、筛选、克隆化，共获得10株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验，选A值≥2．50的2株mAb建立的双mAb夹心ELISA法，敏感性可达2．5ng／L，且与进口试剂盒检测结果的一致性良好。结论：建立了具有高度敏感性和特异性的双mAb夹心ELISA法，为研制可用于检测HIV-1p24抗原的试剂盒奠定了基础。