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人重组pcDNA6.2/生长分化因子5质粒的构建及鉴定
引用本文:曲彦隆,武志超,王春雷,周继辉. 人重组pcDNA6.2/生长分化因子5质粒的构建及鉴定[J]. 中国神经再生研究, 2008, 12(37): 7310-7313
作者姓名:曲彦隆  武志超  王春雷  周继辉
作者单位:哈尔滨医科大学附属第一医院骨科;哈尔滨医科大学附属第一医院骨科;哈尔滨医科大学附属第一医院骨科;哈尔滨医科大学附属第一医院骨科
摘    要:背景:生长分化因子5是一种刺激肌腱、韧带塑型,增强愈合反应有效的生长因子,在活性组织工程肌腱构建中有重要作用。目的:构建人重组pcDNA6.2/生长分化因子5质粒,为转染基质干细胞向肌腱诱导分化实验奠定基础。设计、时间及地点:细胞基因工程体外实验,于2007-08/12在哈尔滨医科大学遗传学教研室和分子生物学教研室完成。材料:根据Genbank(NM000557)中人生长分化因子5的序列化学合成一对引物,从人胎儿软骨组织提取总RNA。方法:通过反转录-聚合酶链反应得到人生长分化因子5完整成熟肽基因。将所得基因片段插入克隆载体pcDNA6.2并转化入JM109菌株,提取重组质粒,PCR鉴定、酶切鉴定并测序。主要观察指标:反转录-聚合酶链反应检测结果,PCR及SalⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定结果,重组质粒测序与Genbank中序列比较结果。结果:电泳显示,反转录-聚合酶链反应产物为一长约380 bp的带,阳性克隆质粒经PCR电泳及双酶切均出现约380 bp的片段。测序表明与Genbank中的序列完全相符。结论:成功构建出人重组pcDNA6.2/生长分化因子5质粒,为组织工程化肌腱过程中种子细胞的制备提供转染质粒。

关 键 词:生长分化因子5;质粒;组织工程;肌腱

Construction and identification of human recombinant pcDNA6.2/growth differentiation factor-5 plasmid
Qu Yan-long,Wu Zhi-chao,Wang Chun-lei and Zhou Ji-hui. Construction and identification of human recombinant pcDNA6.2/growth differentiation factor-5 plasmid[J]. Neural Regeneration Research, 2008, 12(37): 7310-7313
Authors:Qu Yan-long  Wu Zhi-chao  Wang Chun-lei  Zhou Ji-hui
Affiliation:Department of Orthopaedic Surgery, the First Clinical Hospital, Harbin Medical University;Department of Orthopaedic Surgery, the First Clinical Hospital, Harbin Medical University;Department of Orthopaedic Surgery, the First Clinical Hospital, Harbin Medical University;Department of Orthopaedic Surgery, the First Clinical Hospital, Harbin Medical University
Abstract:
Keywords:
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