反义Snail转录因子抑制卵巢癌转移的实验研究

目的探讨反义Snail转录因子抑制卵巢癌转移的机理。方法采用RTPCR技术分别检测卵巢透明细胞癌细胞株ES2、卵巢腺癌细胞株OVCAR3、卵巢浆液性囊腺癌细胞株HO8910和高转移卵巢浆液性囊腺癌细胞株HO8910PM细胞中Snail、E钙黏蛋白mRNA的表达水平。将HO8910细胞分为两组,分别转染反义Snail质粒(反义组)和空载体质粒(对照组),观察Snail对E钙黏蛋白mRNA表达的逆转作用,及对卵巢癌细胞体外侵袭、运动的抑制作用。结果PCR产物凝胶电泳结果显示,SnailmRNA在ES2、HO8910、HO8910PM细胞中有表达,而E钙黏蛋白mRNA仅在OVCAR3细胞中有表达。HO8910细胞瞬时转染0、24、48h时,SnailmRNA的表达水平分别为0.897±0.005、0.865±0.010、0.338±0.014,0与24h时相比,差异有统计学意义(P<0.05);24h与48h时相比,差异有统计学意义(P<0.01);同时,E钙黏蛋白mRNA开始有表达,并随转染时间的增加而增加,0、24、48h时,E钙黏蛋白mRNA表达水平分别为0、0.130±0.001、0.217±0.005,各时间点间分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。HO8910细胞稳定转染后,反义组、对照组SnailmRNA表达水平分别为0.126±0.010、0.355±0.020,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);反义组E钙黏蛋白mRNA开始有表达,表达水平为0.467±0.040,而对照组为0,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);同时,检测间质细胞标志物纤维连接蛋白mRNA的表达水平,反义组为0.191±0.010,显著低于对照组的0.582±0.010(P<0.01)。体外细胞运动实验表明,反义组、对照组跨膜细胞数[分别为(48±2)、(396±29)个/高倍镜(×200)]比较,差异有统计学意义(P<0.01)。重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭实验显示,两组穿透基底膜细胞数[分别为(35±10)、(219±72)个/高倍镜(×200)]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢癌细胞中存在SnailmRNA与E钙黏蛋白mRNA表达的逆转关系,抑制SnailmRNA的表达对卵巢癌细胞的侵袭和运动有抑制作用,可能为卵巢癌转移的基因治疗提供新的靶点。

Inhibitory effects of antisense Snail on invasion and migration of ovarian carcinoma cells