BV6诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡定量蛋白组学研究

目的：通过定量蛋白组学技术探讨Smac类似物BV6影响人卵巢癌SKOV3细胞生长的可能机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各浓度梯度BV6干预SKOV3细胞48 h后的生长抑制率，计算抑制率为50%时的药物浓度为半数抑制浓度（IC50），以0.05、0.1、0.2 μmol/L BV6进行后续实验；光镜下观察对照组与0.05 μmol/L BV6处理组48 h后的细胞形态变化，应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术结合液相串联质谱策略筛选差异蛋白并行生物信息分析；蛋白质印迹（Western blotting）检测对照组、不同浓度BV6处理组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的表达。结果：BV6可以抑制SKOV3细胞的生长增殖，且呈剂量依赖性，多组间方差分析及任意组间两两比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。按公式计算BV6作用于SKOV3细胞48 h的IC50为0.40 μmol/L。基于发现错误率（FDR）＜1%，对照组与0.05 μmol/L BV6处理48 h组筛选到349个差异蛋白，其中251个蛋白表达上调、98个蛋白表达下调，经生物信息学分析显示差异蛋白与RNA转录、蛋白质翻译、细胞分裂增殖、凋亡信号调节及肿瘤血管生成密切相关。Western blotting结果显示高、中、低浓度BV6干预SKOV3细胞48 h后与对照组相比，Caspase-3蛋白表达增加，其中高BV6组的Caspase-3蛋白表达最高，组间差异有统计学意义（均P＜0.05）。结论：BV6通过抑制RNA转录、蛋白质翻译进程、细胞分裂增殖及肿瘤血管生成，促进Caspase-3凋亡信号活化介导SKOV3细胞死亡。

Quantitative Proteomics Analysis of BV6 Inducing Apoptosis in Human Ovarian Cancer SKOV3 Cells