大鼠颌下腺细胞与含血管内皮生长因子(VEGF)的丝素-壳聚糖支架体外复合培养的实验研究

目的研究含血管内皮生长因子(VEGF)的丝素-壳聚糖支架(Silk fibroin-chitosan scaffcold)对大鼠颌下腺细胞(Rat submandibular gland cells RSGCs)粘附、增殖、分泌作用的影响.方法应用体外组织块法原代培养3d龄Wistar大鼠的颌下腺细胞,免疫组织化学法鉴定来源、胰酶消化法和差速贴壁法纯化、传代扩增.冻干技术制作含VEGF的丝素-壳聚糖支架作为实验组,不含VEGF的丝素-壳聚糖支架作为对照组.用作实验组的每个支架含VEGF浓度为10ng/ml.将浓度为5.0×106/ml的第二代大鼠颌下腺细胞悬浊液分别接种于含有VEGF的丝素-壳聚糖支架(实验组)和不含VEGF的丝素-壳聚糖支架(对照组)进行培养.测定实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞的粘附率,免疫组化法鉴定细胞来源.免疫荧光法观察细胞在支架上的生长情况,MTT法检测接种后实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞增殖情况.扫描电镜观察接种大鼠颌下腺细胞在支架上生长的超微结构.测定1d-9d培养复合物上清液中淀粉酶含量,检测实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞分泌功能.采用SPSS for windows 13.0统计分析软件对结果进行方差分析,检验水准α=0.05,P<0.05有统计学意义.结果将纯化扩增的大鼠颌下腺细胞与含VEGF的丝素-壳聚糖支架和不含VEGF的丝素-壳聚糖支架成功的复合培养.细胞粘附率检测:实验组粘附率高于对照组.细胞增殖结果显示(MTT法):接种后1d,实验组细胞数量略大于对照组(P>0.05),而3d-9d,两组支架上的细胞数量有显著性差异(P<0.05),实验组优于对照组.细胞上清液中淀粉酶含量检测:从3d-9d实验组优于对照组,淀粉酶含量差异有统计学意义(P<0.05).扫描电子显微镜观察:丝素-壳聚糖支架呈海绵状结构,植入初期大鼠颌下腺细胞成圆形,散在的粘附于丝素-壳聚糖支架网孔内,随着时间的延长,实验组大鼠颌下腺细胞生长情况明显优于对照组.结论含血管内皮生长因子的丝素-壳聚糖支架对大鼠的颌下腺细胞的粘附、增殖、分泌有促进作用.

Study on the fibroin-chitosan containing VEGF with rat submandibular gland cells in vitro