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| 不同筛选标记法构建白念珠菌RAS1基因敲除株的比较 | |
| 作者单位： | ;1.南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室南京医科大学附属口腔医院牙体牙髓科 |
| 摘 要： | 目的采用两种筛选标记法(HIS-LEU-ARG基因敲除策略和URA-Blaster法)分别构建白念珠菌RAS1基因敲除株,并对两种方法的成功率进行比较。方法 HIS-LEU-ARG基因敲除策略中,以SN152菌株基因组DNA、筛选标记DNA为模板,采用融合PCR技术构建融合基因片段。URA-Blaster法中,以CAI4基因组DNA、hisG-URA3-hisG基因敲除盒为模板,运用无缝克隆技术构建RAS1基因敲除质粒。随后,分别将上述两种方法得到的融合基因片段和质粒线性化产物转染至白念珠菌SN152、CAI4细胞内,在营养缺陷培养基上获得阳性转化子,通过2次同源重组敲除RAS1两条等位基因。结果采用HISLEU-ARG基因敲除策略成功构建RAS1双等位基因敲除株。而采用URA-Blaster方法,重复多次均未能成功构建白念珠菌RAS1双等位基因敲除株。结论 HIS-LEU-ARG基因敲除策略比URA-Blaster法更适用于RAS1基因敲除株的构建。 |
| 关 键 词： | 基因敲除 RAS1基因 SN152菌株 HIS-LEU-ARG URA-Blaster法 |
Comparison of knocking-out the RAS1 gene in Candida albicans using different auxotrophic markers |
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