| 摘 要： | 目的探索药用植物阿里红多糖(fomes officinalis polysaccharides,FOPS)粗提物对刚地弓形虫(toxoplasma gondii,Tg)RH株速殖子体外感染小鼠腹腔巨噬细胞及虫体增殖和凋亡的影响。方法 CCK-8法计算FOPS粗提物对小鼠腹腔巨噬细胞的IC_(50)并筛选安全药物剂量;建立刚地弓形虫RH株速殖子与小鼠腹腔巨噬细胞接种比例为1∶5的体外感染模型,分设空白对照组、强感染对照组和高(400μg/ml)、中(200μg/ml)、低(100μg/ml)剂量组。Hochest 33258荧光染色观察虫体感染小鼠腹腔巨噬细胞6 h、12 h、24 h、36 h、48 h形态及感染率变化;相对定量PCR法检测各实验组弓形虫529基因表达水平并计算虫体相对增殖抑制率;Annexin V-FITC结合流式细胞术检测感染10 h时高剂量(400μg/ml)FOPS对培养上清中游离弓形虫凋亡的影响。结果 FOPS粗提物对小鼠腹腔巨噬细胞的IC_(50)为1 038μg/ml,安全药物剂量为519μg/ml以下。Hochest 33258荧光染色发现高剂量组感染6 h时细胞爬片中TgRH株速殖子无法侵入巨噬细胞且出现核固缩强亮荧光凋亡现象,12 h内感染率仅(5.38±3.08)%,显著低于感染对照组。各药物组巨噬细胞感染率在各时间均低于感染对照组。48 h时中、高剂量组巨噬细胞感染率分别为(85.31±2.33)%和(67.58±3.47)%,低于感染对照组的(92.51±2.88)%,差异有统计学意义(F=150.4,P0.05);低剂量组巨噬细胞感染率为(91.96±2.31)%,与感染对照组相比差异无统计学意义(F=0.46,P0.05)。弓形虫529基因表达水平显示感染48 h时高、中、低剂量FOPS的相对增殖抑制率分别为(75.70±0.03)%、(45.65±0.08)%和(38.98±0.06)%。流式细胞术检测高剂量H-FOP药物组感染10 h时细胞上清中TgRH株速殖子细胞周期发现G1期前典型亚二倍凋亡峰,占弓形虫总数的20.44%。结论 FOPS可抑制刚地弓形虫TgRH株速殖子体外对小鼠腹腔巨噬细胞的感染和细胞内增殖,并在感染初期有抑制虫体入侵巨噬细胞、诱导虫体凋亡的作用。
|
