3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型建立、优化及分子指标鉴定

摘要]：目的：探讨3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（Insulin Resistance，IR）模型建立条件、优化及分子指标鉴定。方法：采用3-异丁基-1-黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine, IBMX），地塞米松（Dexamethason，DEX）和胰岛素联合诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞，油红O染色鉴定。采用1μmol·L-1DEX诱导建立IR-3T3-L1脂肪细胞,1μmol·L-1DEX联合10μmol·L-1罗格列酮（Rosiglitazone，ROS）联合诱导建立IR-3T3-L1脂肪细胞。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法（Glucose oxidase-peroxidase，GOD-POD）检测不同时间点细胞培养液葡萄糖含量，确认IR-3T3-L1细胞模型最佳诱导时间和IR状态稳定性；甘油磷酸氧化酶法(glycerol phosphate oxidase，GPO-POD)测定胞内甘油三酯（Triglyceride，TG）含量。荧光定量qPCR和Western blot法分别检测脂联素（Adiponectin，ADPN）和葡萄糖转运蛋白-4（Glucose transporter 4，GLUT4）mRNA基因和蛋白质表达水平。结果：DEX作用3T3-L1脂肪细胞96h葡萄糖消耗差值比例最大，为46.84%；DEX ROS作用72h葡萄糖消耗差值比例最大，为22.77%，可确认为两种IR模型建立的最佳时间点，其后可保持稳定IR状态至少60h。两类IR细胞中的GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平较正常组显著降低（P<0.01），相较于DEX ROS组，DEX单独诱导细胞内GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平降低更显著。结论：DEX组和DEX ROS组两种诱导方法抑制GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平来建立稳定可靠的IR-3T3-L1细胞模型，但DEX单独诱导IR模型方法更稳定可能与更有效抑制了ADPN mRNA和蛋白表达导致葡萄糖消耗下降更为显著。