细胞外超氧化物歧化酶DNA 甲基化对动脉粥样硬化的诱导作用及作用靶点

目的 探讨细胞外超氧化物歧化酶DNA（EC-DNA）甲基化水平改变在动脉粥样硬化发病中的作用。方法 16 只ApoE-/- 小鼠（ApoE-/- 组）给予高脂饲料喂养,16 只C57BL/6 小鼠（WT 组）给予不含任何高脂成分的普通饲料喂养,分别于喂养第8、12、16 和20 周检测小鼠血脂、主动脉组织形态及丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）含量,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测主动脉组织细胞外超氧化物歧化酶（EC-SOD）、DNMT1 mRNA 水平,巢式甲基化特异性聚合酶链反应检测主动脉组织EC-SOD DNA甲基化程度。将THP-1 诱导为巨噬细胞,分为3 组：空白对照组（NC 组）、空白质粒组（pEGFP-N1 组）和重组质粒组（pEGFP-N1-DNMT1 组）,NC 组用不做任何处理,继续培养,pEGFP-N1 组加入10μl 脂质体Lipofectamine 和20μg 空质粒载体pEGFP-N1,pEGFP-N1-DNMT1 组加入10μl 脂质体Lipofectamine 和20μg pEGFP-N1-DNMT1 重组质粒载体,培养24 h 后检测细胞EC-SOD、DNMT1 蛋白表达和EC-SODDNA 甲基化程度。结果 第8、12、16 和20 周,ApoE-/- 组TC、LDL、TG 呈升高趋势,HDL 无明显变化;各时段ApoE-/- 组TC、LDL、TG、HDL 与WT 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,TC、LDL、TG 高于WT 组,HDL 低于WT 组。第16 和20 周,WT 组动脉组织内皮细胞结构规则有序,ApoE-/- 组主动脉内膜明显增厚并伴炎症浸润。第8、12、16 及20 周,ApoE-/- 组MDA、ROS 呈升高趋势,各时段ApoE-/- 组MDA、ROS 高于WT 组。ApoE-/- 组EC-SOD mRNA 表达水平、DNMT1 mRNA 表达水平和EC-SOD 甲基化水平与WT 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,EC-SOD mRNA 表达水平低于WT 组,DNMT1 mRNA 表达水平和EC-SOD 甲基化水平高于WT 组。pEGFP-N1-DNMT1 组DNMT1 蛋白表达、EC-SOD 甲基化水平及EC-SOD 蛋白表达水平与pEGFP-N1 组和NC 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,pEGFP-N1-DNMT1 组DNMT1 蛋白表达、EC-SOD 甲基化水平高于pEGFP-N1 组和NC 组,EC-SOD 蛋白表达水平低于pEGFP-N1 组和NC 组,pEGFP-N1 组和NC 组EC-SOD、DNMT1 蛋白及EC-SOD 甲基化水平比较差异无统计学意义（P >0.05）。结论 EC-SOD 甲基化程度升高,导致EC-SOD 表达降低,机体抵抗氧化应激反应能力减弱,最终发展成动脉粥样硬化。

Role of extracellular superoxide dismutase methylation in atherosclerosis