pEGFP-smac重组质粒的构建及在sw-480结肠癌细胞中的表达

目的构建一种含凋亡激活因子(second mitochondrial activator of caspase,SMAC)的重组质粒pEGFP-smac,观察其在结肠癌细胞中的表达,为探讨SMAC在结肠癌中抗凋亡作用的分子机制,为结肠癌的治疗提供理论依据。方法从sw-480结肠癌细胞中提取总RNA,以RT-PCR技术扩增SMAC全长基因后,与绿色荧光表达质粒pEGFP-N1构建pEGFP-smac重组质粒,转染sw-480细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光的表达,并对表达产物进行Western blot鉴定。结果 RT-PCR产物及含有重组质粒的菌落PCR产物经琼脂糖电泳,在预期位置(720 bp)处均有目的条带出现;重组质粒成功转染sw-480细胞,在荧光显微镜下强绿色荧光蛋白表达,Western blot鉴定结果显示pEGFP-smac上的SMAC基因在sw-480细胞中正确表达。结论成功构建pEGFP-smac重组质粒,可为进一步研究SMAC蛋白的功能提供重要的分子工具。